RNA干扰抑制ERCC1/ERCC2表达对非小细胞肺癌化疗敏感性影响观察

目的探讨利用RNA干扰技术沉默非小细胞肺癌A549和A549/顺铂(DDP)细胞株ERCC1和ERCC2的表达对DDP化疗敏感性的影响。方法设计并合成靶向基因siRNA-ERCC1和siRNA-ERCC2,并构建载体,通过前期转染A549/DDP细胞,筛选出沉默ERCC1和ERCC2基因表达最优的小分子RNA片段及最佳的作用时间,再将筛选出来的最优片段通过脂质体LipofectamineTM2000转染入A549细胞,观察其转染效率,使用RT-PCR及细胞免疫组化分别检测转染后基因及蛋白的表达变化;利用MTT法检测转染后细胞IC50,观察其对DDP耐药性的变化;再根据实验结果,从A549和A549/DDP细胞株中选定一株能够被逆转耐药的细胞接种于12只裸鼠皮下,观察裸鼠成瘤时间,并加用DDP局部化疗4次,记录肿瘤体积变化情况。结果通过siRNA-ERCC1和siRNA-ERCC2转染A549细胞株后,其ERCC1mRNA相对表达量为104.097 8±8.551 3,未转染组为128.465 6±12.360 4;ERCC2 mRNA相对表达量为90.415 7±7.882 1,未转染siRNA-ERCC2组为123.310 0±10.999 2。转染组的mRNA相对表达量均小于未转染组,P<0.05。转染A549细胞后,转染组ERCC1和ERCC2蛋白表达量分别为1.982 1±0.518 7和2.087 1±0.655 2,明显低于未转染组ERCC1(4.576 4±1.271 1)和ERCC2(5.680 0±1.416 7),P<0.01;MTT结果提示,siRNA-ERCC1和siRNA-ERCC2转染细胞A549后的IC50分别为(20.322 7±0.452 1)和(20.394 7±0.479 4)μg/mL,与未转染组(21.062 4±0.766 4)μg/mL差异无统计学意义,P>0.05;转染A549细胞后未发现逆转DDP耐药的效果,故筛选出A549/DDP细胞株。siRNA-ERCC1转染组的肿瘤体积为(144.63±7.67)mm3,siRNA-ERCC2转染组为(130.65±8.45)mm3,均明显小于未转染组的(252.35±12.36)mm3,P<0.01。结论高效的特异性siRNA能抑制非小细胞肺癌细胞中ERCC1和ERCC2基因和蛋白的表达,并能使A549/DDP细胞株对DDP的耐药性降低,但不能改变A549细胞株对DDP的耐药性。

Effect of RNA interference-mediated ERCC1 and ERCC2 on the chemotherapy sensitivity of NSCLC