HMME介导的光动力疗法对骨肉瘤细胞的杀伤效应及机制研究

目的探讨血卟啉单甲醚介导的光动力疗法（HMME-PDT）对骨肉瘤LM-8细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法将LM-8细胞与不同浓度的HMME（10、20、30gg／m1）共同孵育，4h后，给予不同能量密度的激光（3、6、9J／cm2）照射，同时设空白组（无光敏剂也无光照）、暗毒组（无光照但加入光敏剂）、激光组（不加光敏剂但给予光照）。MTT法检测细胞存活率，采用AnnexinV-FITC／PI染色的流式细胞分析法检测LM-8细胞凋亡和周期情况，Hoechst33342染色法观察细胞凋亡，实时定量PCR（QRT-PCR）分别检测Caspase-3、Bcl-x、p53、RelAmRNA表达水平，免疫印迹（Westernblotting）分别检测caspase-3、Bcl-X、p53、RelA蛋白的相对表达量。结果HMME-PDT能显著抑制骨肉瘤LM-8细胞增殖，且杀伤效应随着HMME浓度及能量密度的增高而增强。然而单独光照或单独给予光敏剂孵育，对骨肉瘤LM-8细胞均无杀伤作用。流式细胞术检测发现凋亡率显著增高，10μg/mlHMME组为（12．3±2．82）％，20μg/mlHMME组为（20．67±5．58）％，30gg／mlHMME组为（42．53±4．641％，凋亡率与空白组比较，结果分别为（f=-2．889，P=0．045）、（f=-4．418，P=0．014）、（t=-5．780，P=0．04）。周期结果显示：G0／G1期细胞明显增高、s期细胞明显降低，301ag／ml组G0／G1期为（50．09±3．151％、S期为（28．17±1．10）％，与空白对照组比较，结果分别为（t=-6．081，P=0．004）、（t=5．852，P=0．004）。HMME-PDT处理LM-8细胞后径Hoeehst33342染色后呈现出典型的凋亡改变（如：核固缩、细胞变圆等）。QRT-PCR和Westernb10ring结果显示：HMME-PDT可显著上调Caspase-3mRNA和蛋白相对表达量且表达量随着HMME浓度增高而增高。而HMME-PDT可明显下调Bcl-x、p53、RelAmRNA和蛋白相对表达量且表达量随着HMME浓度增高而降低。结论在体外HMME-PDT对骨肉瘤LM-8细胞有显著的杀伤效应，其杀伤效应与Caspase-3、Bcl-x、p53和RelA密切相关。

Study on the killing effect and mechanism of hematoporphyrin monomethyl ether mediated photodynamic therapy on osteosarcoma cells