| Fibulin-5真核表达载体的构建及稳定转染人膀胱癌细胞的研究 |
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| 引用本文： | 闫永吉,李炯明,刘建和,陈戬,姜永明,张劲松.Fibulin-5真核表达载体的构建及稳定转染人膀胱癌细胞的研究[J].中华实验外科杂志,2012,29(4). |
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| 作者姓名： | 闫永吉 李炯明 刘建和 陈戬 姜永明 张劲松 |
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| 作者单位： | 650101,昆明医学院第二附属医院微创泌尿外科 |
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| 摘 要： | 目的 构建Fibulin-5真核表达载体并转染人膀胱癌5637细胞.方法 经聚合酶链反应(PCR)扩增Fibulin-5 cDNA,然后将其与pMD-19T载体连接.pMD-19T-Fibulin-5重组体经过限制性内切酶Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ的消化后产生Xho Ⅰ-Fibulin5-EcoR Ⅰ片段.将该片段插入增强型绿色荧光蛋白载体(p-EGFP N1)质粒的相似位点并最终合成p-EGFP-F5质粒重组体,并通过BgⅢ单酶切鉴定.通过脂质体介导法将p-EGFP-F5质粒转染至人膀胱癌5637细胞株内.结果 PCR扩增片段长度为1429 bp.Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切的片段经DNA测序显示Fibulin-5 cDNA插入正确.p-EG-FP-F5质粒重组体经BgⅢ单酶切出一约450 bp的条带.转染48 h后,pEGFP-Fibulin-5和pEGFP-N1转染成功的细胞均有不同程度的绿色荧光表达.结论 成功构建Fibulin-5绿色荧光蛋白真核表达载体并转染至人膀胱癌细胞内.
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| 关 键 词： | 膀胱癌 真核表达载体 转染 Fibulin-5 |
Construction of Fibulin-5 eukarvotic expression vector and establishment of its stable transfected bladder cancer cell line |
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| YAN Yong-ji
,
LI Jiong-ming
,
LIU Jian-he
,
CHEN Jian
,
JIANG Yong-ming
,
ZHANG Jin-song.Construction of Fibulin-5 eukarvotic expression vector and establishment of its stable transfected bladder cancer cell line[J].Chinese Journal of Experimental Surgery,2012,29(4). |
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| Authors: | YAN Yong-ji LI Jiong-ming LIU Jian-he CHEN Jian JIANG Yong-ming ZHANG Jin-song |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bladder carcinoma Eukaryotic expression vector Transfection Fibulin-5 |
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