siRNA沉默ERK5基因对MC 3 T3-E1成骨细胞增殖及 BMP2/BMP7的影响 |
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引用本文: | 滕元君,陈少龙,赵良功,姜金,崔兆辉,夏亚一 汪静,王翠芳,安丽萍,马靖琳.siRNA沉默ERK5基因对MC 3 T3-E1成骨细胞增殖及 BMP2/BMP7的影响[J].中国骨质疏松杂志,2014(9). |
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作者姓名: | 滕元君 陈少龙 赵良功 姜金 崔兆辉 夏亚一 汪静 王翠芳 安丽萍 马靖琳 |
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作者单位: | 兰州大学第二医院骨科甘肃省骨与关节重点实验室; |
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基金项目: | 国家自然科学基金(81071478);兰州大学第二医院院内课题(YJ2010-03);甘肃省卫生行业计划(GSWST-2011-07) |
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摘 要: | 目的观察ERK5信号通路对MC3T3-E1成骨细胞的增殖,及功能分化蛋白BMP2/BMP7的影响。方法应用小RNA分子干扰技术(siRNA)沉默ERK5基因,分别将浓度为20、40、60、80 nmol/L的ERK5 siRNA干预MC3T3-E1成骨细胞,筛选ERK5 siRNA转染的最佳浓度。噻唑蓝实验(MTT)检测转染后12 h、24 h、36 h和48 h细胞的增殖情况,实时荧光定量PCR检测ERK5、BMP2和BMP7 mRNA的表达。Westernblot检测不同干预组BMP2及BMP7蛋白的表达变化。结果当ERK5siRNA浓度为60 nmol/L时,MC3T3-E1成骨细胞的ERK5 mRNA的表达下降最为显著,沉默率为76.8±2.2%(P0.01)。ERK5 siRNA转染后12 h、24 h、36 h,成骨细胞的增殖受到明显抑制(P0.05),但48 h转染组未发现明显变化(P0.05)。ERK5 siRNA转染24 h后,实时荧光定量PCR结果显示:空白组与对照siRNA组成骨细胞的BMP2/BMP7 mRNA变化水平无显著性差异(P0.05),但ERK5 siRNA转染组的BMP2/BMP7 mRNA明显降低(P0.05);Westernblot结果显示,空白组与对照siRNA组成骨细胞的BMP2/BMP7蛋白未发现明显变化(P0.05),但转染组成骨细胞的BMP2/BMP7显著降低(P0.05)。结论 ERK5 siRNA对MC3T3-E1成骨细胞的增殖以及骨形态蛋白BMP2和BMP7的表达有明显抑制作用。
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关 键 词: | 成骨细胞 细胞增殖 骨形态蛋白 小RNA分子干扰 细胞外信号调节激酶 |
Effect of ERK5 siRNA on cell proliferation and BMP2/BMP7 expression in MC3T3-E1 osteoblasts |
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