酶免疫法测定红细胞醛糖还原酶

本文报告了一种用单克隆和多克隆抗重组人醛糖还原酶抗体测定人红细胞(RBC)醛糖还原酶的两步免疫法。反应时间2.5h、检测限<0.05μg/L,回收率101～106％,批内、批间CV:分别为3.7％和4.8％。用本法测得的酶含量与酶活性具有良好的相关性。酶含量与年龄无关,但女性高于男性。作者认为该法的建立对合理使用醛糖还原酶抑制剂类药物、预防和治疗糖尿病合并症具有重要价值。单克隆抗体制备:50μg纯化重组醛糖还原酶与Freund完全佐剂混合注入BALB/C小鼠腹腔.3周后强化注射。强化3天后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。杂交瘤介质中分泌的抗体用经抗原包被的免疫板筛选。大批量制备时,小鼠腹水中生成的单克隆抗体(mAb)经饱和(NH_4)_2SO_4沉淀,0.1