| 人WAF1基因的克隆及其生物调控作用 |
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| 引用本文： | 侯治富,卜丽莎,王华,郑德明,吴晓冬,王维忠,王丽颖.人WAF1基因的克隆及其生物调控作用[J].中华血液学杂志,2001,22(10):I010-1. |
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| 作者姓名： | 侯治富 卜丽莎 王华 郑德明 吴晓冬 王维忠 王丽颖 |
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| 作者单位： | 1. 求恩医科大学第三临床学院
2. 白求恩医科大学基础医学院 |
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| 基金项目： | 吉林省科技发展计划项目(970567-1) |
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| 摘 要： | 目的 克隆人WAF1基因，构建成WAF1－pcDNA3真核表达质粒，探索WAF1基因的生物调控功能。方法 采用RT－PCR和DNA直接测序方法从Hela细胞中扩增人WAF1基因，通过克隆到pcDNA3真核克隆载体上，用脂质体法转染Hct-8细胞；经免疫荧光和免疫组化方法鉴定WAF1外源基因的表达活性和对Rb基因,cyclinD1基因的调控作用。结果 从Hela细胞扩增的从WAF1基因克隆至真核克隆表达载体pcDNA3中，获得了人WAF1－pcDNA3重组质粒和高效表达P21WAF1／CIP1的Hcl-8细胞株；证实了WAF1具有促进Rb,抑制cyclinD1蛋白表达的调控作用。结论 成功地构建了人WAF1表达质粒WAF1－pcDNA3，外源基因WAF1的表达对下游基因具有生物调控效应。
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| 关 键 词： | WAF1基因 基因克隆 直接测序 调控效应 |
Cloning and biological regulating effects of human WAF1 gene |
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| HOUZhifu,BULisha,WANGHua,et al..Cloning and biological regulating effects of human WAF1 gene[J].Chinese Journal of Hematology,2001,22(10):I010-1. |
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| Authors: | HOUZhifu BULisha WANGHua |
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| Institution: | Third Clinical College and School of Basic Medical Sciences, Norman Bethune University of Medical Sciences, Changchun 130031, China. |
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| Abstract: | Objective ToclonehumanWAF1geneandconstructWAF1 pcDNA3recombinantplas mid ,andtoexplorethebiologicalregulatingeffectsofWAF1gene.Methods HumanWAF1genewasam plifiedandclonedintopcDNA3vectorbyRT PCRandDNAdirectsequencingfromHelacells.Byim munofluorescenceandimmunohistochemistrystaining ,toidentifytheexpressionoftheinsertedWAF1gene anditsbiologicalregulatingeffectsonRb ,cyclinD1gene.Results HumanWAF1 pcDNA3recombinant plasmidwascorrectlyconstructedandtransfectedintoHct 8cells.P2 1WAF1/Cip1wassuccessfullyex pressed .ThefunctionalcharacterizationoftheinsertingWAF1geneimpliedthatP2 1WAF1/Cip1expression couldupregulateRbgeneanddownregulatecyclinD1geneatproteinlevel.Conclusion HumanWAF1 pcDNA3canmodulatetheproteinexpressionofthedownstreamgene . |
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| Keywords: | Gene WAF1 Gene cloning Direct sequencing Regulating effect |
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