大鼠膜联蛋白A_2真核表达载体的构建及表达 |
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引用本文: | 刘庆梅,怀 娟,张 杨,姜 虹,岳寿伟.大鼠膜联蛋白A_2真核表达载体的构建及表达[J].中国康复医学杂志,2010,25(10):937-941. |
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作者姓名: | 刘庆梅 怀 娟 张 杨 姜 虹 岳寿伟 |
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作者单位: | 1. 山东大学齐鲁医院康复科,济南,250012 2. 山东大学齐鲁医院教育部和卫生部心血管重构和功能研究重点实验室 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助课题,山东省自然科学基金资助课题 |
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摘 要: | 目的:克隆大鼠背根神经节膜联蛋白A2(annexin Ⅱ)的基因,构建真核表达载体并检测其表达。方法:以RT-PCR法扩增大鼠背根神经节(DRG)细胞中膜联蛋白A2(annexin Ⅱ)的基因,构建pGMT-Anxa2克隆载体,以此为模板插入flag标签扩增Anxa2-flag序列,将其定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+),获得表达载体pcDNA3.1(+)-Anxa2-flag。以PCR、双酶切及序列测定法鉴定该质粒。以脂质体法将表达载体转染到HEK293细胞中,Western印迹和细胞免疫荧光检测annexin Ⅱ蛋白表达及细胞内定位。结果:PCR扩增Anxa2-flag片段大小与预期相同。通过PCR、HindⅢ和NotⅠ双酶切及测序鉴定,证明构建出了含大鼠annexin Ⅱ基因的真核表达载体。Western印迹和细胞免疫荧光的检测表明大鼠annexin Ⅱ基因稳定表达,并可在胞膜和胞质中广泛表达。结论:成功构建pcDNA3.1(+)-Anxa2-flag真核表达载体,并稳定表达蛋白,为研究annexin Ⅱ调控DRG伤害性感受传导的分子机制奠定基础。
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关 键 词: | 背根神经节 膜联蛋白A2 真核表达载体 Western印迹 免疫荧光 |
收稿时间: | 8/2/2010 12:00:00 AM |
Construction and expression of eukaryotic expression vector for rat annexin Ⅱ |
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Abstract: | |
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Keywords: | |
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