炎症胶质细胞中诱导型一氧化氮合酶基因转录的机制

目的：通过瞬时转染p38MAPK途径中上游激酶，组成激活型MAPK激酶3和MAPK激酶6，进一步了解p38MAPK级联传导信号系统调节诱导型一氧化氮合酶基因在胶质细胞中的转录激活机制。 方法：实验于2003-01／2004-08在美国南卡洲医科大学神经科学研究室和南通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室进行。采用MAPK激酶3和MAPK激酶6表达质粒与接有荧光素酶的大鼠诱导型一氧化氮合酶启动基因质粒；cAMP反应元件和核因子-κB联合转染C6胶质细胞株。测定荧光素酶活性，观察诱导型一氧化氮合酶基因激活表达机制。 结果：①MKK3b／MKK6b能引起诱导型一氧化氮合酶启动基因质粒的激活，并都能够被p38MAPK抑制剂SB203580所抑制。②MKK可以诱导cAMP反应元件介导的和核因子-κB依赖的转录活性。③显性抑制型CRE结合蛋白和CCAAT／增强子结合蛋白都是p38MAPK的靶向作用目标，转染这两种转录因子产生相反的影响：显性抑制型CRE结合蛋白增强了诱导型一氧化氮合酶启动基因质粒的表达，而显性抑制型CCAAT／增强子结合蛋白则引起抑制作用，对cAMP反应元件也具有相同的影响。④此外，激活型MAPK激酶3和MAPK激酶6诱导诱导型一氧化氮合酶启动子的激活能够被野生型活化转录因子增强。然而磷酸化缺陷型的野生型活化转录因子则起抑制作用。 结论：转录因子的靶向作用特点，对于炎症反应中NO的过量产生具有选择干扰性，在临床上具有实用价值。