泻脏方法促进再生障碍性贫血小鼠骨髓造血功能恢复

目的：观察泻脏方法（六味地黄丸之三泻，即泽泻、茯苓、丹皮）治疗再生障碍性贫血效果，并分析其作用途径。 方法：实验于2004-08／2005-01在成都医学院第一附属医院康复医学科完成。①选用昆明种雄性小鼠60只，鼠龄90d，体质量（20．0&;#177;0．3）g。按随机抽签法将小鼠分为6组：空白对照组，造模组，阳性药物对照组。高、中、低剂量中药治疗组，每组10只。②小鼠驯养1周后。造模组及4个治疗组采用理化因素复合造模：一次全身2.5Gy^ 60Co-γ射线照射（剂量率1．105 3Gy／min，距离240cm。时间135s），照射后4,5,6d腹腔注射环磷酰胺40mg／kg，氯霉索50mg／ks。空白对照组小鼠假照射（铅砖屏蔽）照射后4，5，6d腹腔注射等容量生理盐水。③造模完成后第1天开始用药。阳性药物对照组；灌胃4mg／（kg&;#183;d）司坦唑醇（广西佳兆药业有限责任公司，批号020305，2．0mg／片）混悬液；高、中、低剂量中药治疗组：灌胃0．5mL／（20g&;#183;d）相应高、中、低浓度泻脏方法治疗组方（组方：六味地黄丸之三泻泽泻、丹皮、茯苓各28g；制备：两煎，每煎加水1050mL，各煎得525mL，混匀，分为150，300，600m L3组，水浴浓缩600和300mL各得150mL，分别为高、中浓度，未浓缩的150mL为低浓度。泻脏方法高、中、低浓度药物每毫升含生药0．32，0．16，0．08g）；空白对照组和造模组灌胃等容生理盐水。共干预时间13d。④停药当日处死小鼠，取左侧股骨，甲醛溶液固定。采用Mias-2000图形分析系统，奥林巴斯BX50光学显微镜检测骨髓细胞核常规苏木精-伊红染色（反映骨髓细胞数），骨髓切片免疫组化染色Ki-67（反映骨髓细胞增生情况）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（反映骨髓细胞凋亡情况）、CD34（反映骨髓微循环情况）相关指标。⑤计量资料差异比较采用单因素方差分析，两组间比较采用LSD及SNK分析。 结果：实验结束时，造模组，高、中、低剂量中药治疗组分别死亡4，4，3，1只，其他2组无死亡；空白对照组随机选取6只，进行所有指标的检测；造模组，阳性药物对照组，高、中、低剂量中药治疗组纳入苏木精-伊红染色检测结果统计6，10，6，7，9只；进行其余3项指标检测结果统计时在各组内随机选取6只。①阳性药物对照组、低剂量中药治疗组细胞核积分A值和细胞核面积明显高于造模组（P〈0．01），细胞核平均A值、细胞核灰度明显低于造模组（P〈0.01）；高、中剂量中药治疗组细胞核积分A值明显高于造模组（P〈0.05），细胞核灰度与造模组相近（P〉0．05）；高剂量中药治疗组细胞核面积明显高于造模组（P〈0.01），细胞核平均A值明显低于造模组（P〈0．01）；中剂量中药治疗组细胞核面积明显高于造模组（P〈0.05），细胞核平均A值与造模组相近（P〉0．05）。说明低剂量中药治疗组治疗效果最显著。②造模组骨髓切片免疫组化染色Ki-67相关指标积分A值、面积、平均A值明显低于空白对照组和低剂量中药治疗组（P〈0.01）。③造模组骨髓切片免疫组化染色半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3相关指标积分A值明显低于空白对照组和低剂量中药治疗组（P〈0．01），面积和平均A值明显高于空白对照组和低剂量中药治疗组（P〈0．01）。④造模组骨髓切片免疫组化染色CD34相关指标周长、最大直径、最小直径明显低于空白组和低剂量中药治疗组（P〈0．01），面积明显低于低剂量中药治疗组（P〈0．01）。 结论：用三泻代表的泻脏方法（尤以低剂量显著）可促进髓内细胞增生，抑制髓内细胞凋亡，改善髓内微循环，从而促进理化因素所致再生障碍性贫血模型小鼠骨髓造血功能恢复。

Effect of reducing zang method in the promotion of hematopoietic function of bone marrow in mice with aplastic anemia