兔骨髓源性神经干细胞体外分化为神经元样细胞的功能特性研究

目的：检测由骨髓源性神经干细胞诱导分化而成的神经元样细胞，能否分泌γ—氨基酸(γ—aminobutyric acid，GABA)神经生物活性物质成分，从而初步推断是否具有神经元的生化特征。方法：无菌条件下抽取新西兰大白兔骨髓，梯度密度离心分离获取骨髓基质细胞(bone marrow stroma cells，BMSCs)，在神经干细胞培养基及脑源性神经营养因子(BDNF)等条件下，于体外诱导分化为神经干细胞及神经元样细胞，采用免疫细胞化学方法进行鉴定，并应用高效液相色谱法(HPLC)检测GABA生物活性物质的含量。结果：BMSCs培养12d可见细胞大而圆，免疫细胞化学检测巢蛋白抗原阳性；培养20d可见具有长突起的神经元样细胞形成，神经元核蛋白免疫细胞化学检查阳性，HPLC检测骨髓源性神经元样细胞含有高浓度GABA神经递质成分。方差分析显示：随着BMSCs培养天数的增加，其所含的GABA浓度也渐增加，由每1&;#215;10^7细胞中(3．43&;#177;0．25)μmol／L增至(14．69&;#177;3．51)μmol／L(F=23．69，P=0．0014)。结论：兔BMSCs在体外条件下可以增殖分化，前期表达Nestin，分化的细胞则可表达NeuN特异性抗体，并含有高浓度的类GABA神经递质成分。