| PTEN基因重组慢病毒的构建 |
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| 引用本文： | 陈玲娜,蒋磊,谷杭芝,郑飞云.PTEN基因重组慢病毒的构建[J].实用医学杂志,2010,26(23). |
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| 作者姓名： | 陈玲娜 蒋磊 谷杭芝 郑飞云 |
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| 基金项目： | 浙江省教育厅科研项目，温州市科技计划项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建PTEN基因重组慢病毒,转染真核细胞Ishikawa并检测PTEN基因在真核细胞内的表达.方法:分子克隆重组人PTEN基因与含有CMV启动子和绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体PLIG,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.将重组子PLIG-PTEN和包装质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,感染子宫内膜癌细胞株Ishikawa,观察慢病毒表达载体所携带的GFP基因在细胞内的表达,使用RT-PCR和western-blot检测PIEN基因在细胞内的表达水平.结果:PCR和测序证实,成功克隆慢病毒载体PLIG-PTEN,包装慢病毒,感染真核细胞Ishikawa后48 h,观察到绿色荧光的广泛表述并检测出宿主细胞内表达的PTENmRNA成功表达PTEN蛋白.结论:本实验成功地构建了人PTEN基因慢病毒载体,并观察到PTEN基因在真核细胞中的成功表达.
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| 关 键 词： | 慢病毒属 PTEN Ishikawa细胞 |
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