| 应用聚合酶链反应技术构建人血小板反应素1基因第13外显子编码钙结合域突变体 |
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| 引用本文： | 戴健,马继政,刘剑南,陈相健,杨志健,杨笛,张寄南.应用聚合酶链反应技术构建人血小板反应素1基因第13外显子编码钙结合域突变体[J].中国组织工程研究与临床康复,2005,9(43):72-74. |
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| 作者姓名： | 戴健 马继政 刘剑南 陈相健 杨志健 杨笛 张寄南 |
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| 作者单位： | 南京医科大学第一附属医院心内科暨心血管病研究所,江苏省135重点实验室,江苏省人类功能基因组重点实验室,江苏省,南京市,210029 |
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| 基金项目： | 江苏省高新技术研究(BG2003033)~~ |
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| 摘 要： | 目的:利用聚合酶链反应定点突变技术构建人血小板反应素1基因第13外显子编码钙结合域突变体。方法:实验于2005-03/06在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。选择南京医科大学第一附属医院体检中心健康体检者血标本提取人基因组DNA,设计、合成两对引物,将突变位点设计在引物内,突变位点包含限制性内切酶BseNI酶切位点,采用聚合酶链式反应定点突变技术,应用高保真TaqDNA聚合酶,通过三轮聚合酶链扩增反应对血小板反应素1基因的第13外显子进行扩增,将第13外显子碱基8831A置换为G,对最终扩增产物进行酶切鉴定和测序。结果:获得人血小板反应素1第13外显子编码钙结合域突变体,经酶切鉴定和测序分析,除引入突变点产生预期A8831→G突变外,其余碱基序列无改变。结论:采用聚合酶链反应体外定点突变技术,成功构建人血小板反应素1基因第13外显子编码钙结合域突变体,为研究血小板反应素1基因该位点突变导致血小板反应素1蛋白的结构、功能变化奠定了基础。
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| 关 键 词： | 血小板吸附蛋白1 聚合酶链反应 突变 序列分析 |
| 文章编号： | 1671-5926(2005)43-0072-)3 |
| 修稿时间： | 2005年8月2日 |
Establishing the mutant of coding calcium binding fragment of the 13th exon of human thrombospondin-1 gene with polymerase chain reaction |
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| Dai Jian,Ma Ji-zheng,Liu Jian-nan,Chen Xiang-jian,Yang Zhi-jian,Yang Di,Zhang Ji-nan.Establishing the mutant of coding calcium binding fragment of the 13th exon of human thrombospondin-1 gene with polymerase chain reaction[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2005,9(43):72-74. |
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| Authors: | Dai Jian Ma Ji-zheng Liu Jian-nan Chen Xiang-jian Yang Zhi-jian Yang Di Zhang Ji-nan |
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