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血管内皮生长因子C靶向RNA干扰重组载体的构建和效应检测
引用本文:周慧聪,张艳,亢春彦,李继昌.血管内皮生长因子C靶向RNA干扰重组载体的构建和效应检测[J].中国组织工程研究与临床康复,2007,11(32):6379-6382.
作者姓名:周慧聪  张艳  亢春彦  李继昌
作者单位:1. 郑州大学第一附属医院消化内科,河南省郑州市,450052
2. 郑州大学基础医学院药理教研室,河南省郑州市,450052
3. 河南省职工医学院病理教研室,河南省郑州市,450052
摘    要:目的:构建针对人血管内皮生长因子C小干扰RNA表达载体,并观察其在胃癌细胞中的干扰效果。方法:实验于2006-02/2007-02在河南省分子医学重点学科开放实验室完成。①实验材料:小干扰RNA表达载体pSilencer3.1为美国Ambion公司产品;胃癌细胞SGC7901为河南省分子医学重点学科开放实验室保存;血管内皮生长因子C基因的干扰片断和聚合酶链反应引物(152bp)由上海生工生物公司合成。②实验过程:根据pSilencer3.1-H1载体要求设计靶向血管内皮生长因子C基因的两对小干扰RNA,退火后连接入载体相应位点,构建重组表达质粒。经酶切和测序鉴定后分别转染胃癌细胞株SGC-7901,经G418筛选,获得稳定表达的细胞株。③实验评估:采用反转录-聚合酶链反应和Westernblot法检测血管内皮生长因子CmRNA和蛋白水平的表达。结果:①重组质粒的酶切、核苷酸序列分析结果:经酶切和测序鉴定证实成功构建了血管内皮生长因子C小干扰RNA表达载体,建立了稳定转染细胞株。②稳定转染的细胞株中血管内皮生长因子CmRNA和蛋白表达:反转录-聚合酶链反应和Western blot显示转染后血管内皮生长因子C表达与对照组相比有不同程度的降低,以pSilencer3.1-neo-VEGF-C1尤为明显,抑制血管内皮生长因子C表达,不影响细胞的生长。结论:成功构建了血管内皮生长因子C小干扰RNA表达载体及稳定转染的胃癌细胞株。

关 键 词:RNA  小分子干扰:血管内皮生长因子C  组织构建
文章编号:1673-8225(2007)32-06379-04
修稿时间:2007-01-26

Construction and identification of small interfering RNA expression vector targeting vascular endothelial cell growth factor-C
Zhou HC,Zhang Y,Kang CY,Li JC.Construction and identification of small interfering RNA expression vector targeting vascular endothelial cell growth factor-C[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2007,11(32):6379-6382.
Authors:Zhou HC  Zhang Y  Kang CY  Li JC
Institution:1.Department of Gastroenterology, First Affiliated Hospital, Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, Henan Province, China; 2.Department of Pharmacology, College of Basic Medical Sciences, Zhengzhou University, Zhengzhou 450052 Henan Province, China;3.Department of Pathology, Henan Provincial Staff Medical College, Zhengzhou 450052, Henan Province, China
Abstract:
Keywords:
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