人脂肪组织分离培养基质干细胞的方法及其表型鉴定

目的:分离培养人脂肪基质干细胞,鉴定其表型。方法:实验于2005-03/2005-12在华中科技大学同济医学院血研所实验室完成。脂肪组织取自华中科技大学同济医学院附属协和医院普通外科阑尾炎及腹股沟斜疝的14例手术患者,排除了冠心病、高血压病及糖尿病等。手术前均与本人谈话并征得其同意获取脂肪组织进行实验。分离人脂肪组织,胶原酶消化后制备细胞悬液并培养,消化传代以纯化细胞。传代的脂肪基质干细胞进行细胞生长曲线绘制,流式细胞术及免疫荧光法检测其表型。结果:14份标本均成功培养出脂肪基质干细胞并生长良好,平均传至20～25代。①原代细胞培养72h后可见细胞贴壁,5d后可见细胞呈纺锤形、多角形改变,9d后细胞生长明显增加,排列密集并呈涡旋状生长,随着培养时间的延长,梭形细胞逐渐占据优势。到第12天后可见细胞铺满瓶底80%。传代后细胞增殖速度明显加快,于第3天开始数量明显增多,五六天后细胞即已长满培养瓶底,融合成片状,细胞排列更加整齐有序。多次传代后细胞呈更均匀有序的分布。②脂肪基质干细胞倍增时间约为48h。③第5代的脂肪基质干细胞细胞表型,呈CD31-,CD34-,CD45-,HLA-DR-,CD29 ,CD105 。④免疫荧光法鉴定脂肪基质干细胞表达CD13和CD44。结论:本实验成功从人脂肪组织中分离培养出基质干细胞,通过流式细胞术和免疫荧光检测,培养后的细胞表达CD13、CD29、CD44、CD105,而不表达CD31、CD34、CD45、HLA-DR。

Isolation, culture and identification of human adipose tissue derived stem cells