siRNA沉默肾上腺髓质素基因对黑素瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）沉默肾上腺髓质素（ADM）基因对黑素瘤细胞系A375增殖和凋亡的影响。方法 实时荧光定量-PCR（qRT-PCR）检测干扰效果，并选出干扰效果最好的siRNA。用筛选出的最有效siRNA转染A375细胞为实验组；转染非特异序列的细胞为阴性对照组，未转染的细胞为空白对照组。免疫细胞化学法蛋白水平检测干扰效果；噻唑蓝法（MTT）分别测定沉默ADM基因 24、48 h后A375细胞增殖的变化；流式细胞仪（FCM）检测干扰ADM基因48 h后A375细胞的凋亡情况。结果 qRT-PCR显示ADM-siRNA-2干扰效果最好。免疫细胞化学结果显示转染ADM-siRNA-2后ADM蛋白的表达显著低于未转染组和阴性对照组。MTT结果显示，转染ADM-siRNA-2的细胞24、48 h吸光度A值为0.389 ± 0.0375，0.469 ± 0.0330，低于空白对照组 （ 0.574 ± 0.0733、0.685 ± 0.0154）和阴性对照组（0.548 ± 0.0376、0.676 ± 0.0374），差异均有统计学意义（P值均 < 0.05），空白对照组和阴性对照组比较，差异无统计学意义（P值均 ＞ 0.05）。FCM检测显示转染ADM-siRNA-2组的细胞早期凋亡率为（20.200 ± 6.046）%，高于空白对照组（1.667 ± 0.340）%和阴性对照组（4.587 ± 1.294）%，差异有统计学意义（P值均 < 0.05），空白对照组和阴性对照组比较，差异无统计学意义（P值均 ＞ 0.05）。结论 siRNA沉默ADM基因对A375增殖有抑制作用；而对凋亡则有明显促进作用。

Impact of small interference RNA-induced silencing of adrenomedullin gene on the growth of and apoptosis in malignant melanoma cells