简并PCR结合RACE法克隆希木龙念珠菌CDR1基因 |
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引用本文: | 张浩,王千,周亚彬,李若瑜,刘伟.简并PCR结合RACE法克隆希木龙念珠菌CDR1基因[J].中国皮肤性病学杂志,2018(1). |
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作者姓名: | 张浩 王千 周亚彬 李若瑜 刘伟 |
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作者单位: | 北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室; |
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摘 要: | 目的克隆希木龙念珠菌中药外排泵基因(CDR1),为探讨希木龙念珠菌的耐药机制奠定基础。方法首先从NCBI基因数据库中找到已知的白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌和光滑念珠菌Cdr1蛋白的氨基酸保守序列,并设计简并引物,PCR扩增获得希木龙念珠菌CDR1c DNA部分片段,接着使用RACE方法分别扩增其5'和3'端序列得到完整的CDR1编码序列(CDS)。结果简并PCR扩增得到预期2 210bp大小的片段;5'RACE和3'RACE分别得到CDR1c DNA 5'和3'端片段,经纯化、克隆、测序、比对和拼接分别得到两株菌完整的CDR1c DNA序列;其编码的蛋白序列经比对发现与其它念珠菌的Cdr1蛋白高度同源。结论利用简并PCR联合RACE方法能够有效、准确地克隆出希木龙念珠菌CDR1基因。
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本文献已被 CNKI 等数据库收录! |
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