快速检测结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药相关基因mPCR-SSCP建立及应用

目的 建立快速检测结核分枝杆菌异烟肼(INH)和利福平(RFP)耐药相关基因katG、inhA和rpoB突变的多重聚合酶链反应-单链构象多态性(multi PCR-single strand conformational polymorphism analysis,mPCR-SSCP)方法.方法 药敏试验检测134株结核分枝杆菌临床菌株对INH和RFP的耐药性.设计结核分枝杆菌INH和RFP耐药相关katG、inhA和rpoB基因PCR引物,建立mPCR-SSCP技术检测上述菌株katG、inhA和rpoB基因的突变,同时采用PCR直接测序技术(PCR-DS)检测上述基因片段突变情况,并对上述3种方法检测结果进行分析和比较.结果 134株临床菌株均含有katG、inhA和rpoB基因,其中42株(31.3％)对INH耐药、45株(33.6％)对RFP耐药.mPCR-SSCP和PCR-DS检测结果显示,92株INH敏感菌株katG和inhA基因均未发生突变,检测特异性均为100％；89株RFP敏感菌株中rpoB基因分别有2株和1株检测出突变,检测特异性分别为97.8％和98.9％；42株INH耐药菌株中分别有33株和36株katG和/或inhA基因突变,检测灵敏度分别为78.6％和85.7％；45株RFP耐药菌株中rpoB基因分别有41株和43株发生突变,检测灵敏度分别为91.1％和95.6％.结论 本研究建立的mPCR-SSCP能快速、简便、特异,并有一定的敏感性检测结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药相关基因katG、inhA和rpoB突变,具有临床应用前景.

Establishment and application of multi-PCR-SSCP assay for rapid detection of isoniazid- and rifampin-resistance Mycobacterium tuberculosis isolates