| 钩端螺旋体毒性蛋白VapC核酸酶活性及其对宿主细胞毒性作用的研究 |
| |
| 引用本文： | 辛晓阳,林旭瑷,李立伟,严杰.钩端螺旋体毒性蛋白VapC核酸酶活性及其对宿主细胞毒性作用的研究[J].中华微生物学和免疫学杂志,2012,32(2):166-171. |
| |
| 作者姓名： | 辛晓阳 林旭瑷 李立伟 严杰 |
| |
| 作者单位： | 浙江大学医学院病原生物学系, 杭州,310058 |
| |
| 摘 要： | 目的 了解钩端螺旋体毒素-抗毒素系统中毒性蛋白VapC的功能及其对宿主细胞的毒性作用.方法 以致病性问号钩体黄疸出血群赖型赖株基因组DNA为模板,采用PCR扩增全长vapB、vapC、vapBC基因并构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rVapB和rVapC 表达情况,Ni-NTA亲和层析柱提纯rVapB和rVapC.检测rVapB和rVapC有无水解问号钩体赖株及THP-1细胞DNA或RNA活性.分别采用实时荧光定量PCR和Western blot试验,检测问号钩体赖株感染THP-1细胞前后vapB和vapC基因转录及表达水平的变化.构建vapB和vapC基因真核表达载体并转染细胞,采用CCK-8试剂检测VapB和VapC蛋白对细胞活性的影响.结果 所克隆的vapB和vapC基因核苷酸及氨基酸序列与文献报道完全相同.所构建的原核表达系统能分别表达rVapB 和rVapC.rVapC可水解RNA,但不水解DNA.问号钩体赖株感染THP-1细胞后,vapB和vapC基因 转录及表达水平均显著上调,部分毒性蛋白VapC外分泌.转染vapC基因的人肾小管上皮细胞HEK293大量死亡.结论 问号钩体赖株VapC蛋白为RNA酶,可在感染宿主细胞过程中外分泌并对细胞有明显毒性.
|
| 关 键 词： | 致病性钩端螺旋体 毒素-抗毒素系统 毒性蛋白 核酸酶活性 细胞毒性 |
Nuclease activity and cytotoxicity to host cells of toxic protein VapC produced by Leptospira species |
| |
| XIN Xiao-yang
,
LIN Xü-ai
,
LI Li-wei
,
YAN Jie.Nuclease activity and cytotoxicity to host cells of toxic protein VapC produced by Leptospira species[J].Chinese Journal of Microbiology and Immunology,2012,32(2):166-171. |
| |
| Authors: | XIN Xiao-yang LIN Xü-ai LI Li-wei YAN Jie |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Pathogenic Leptospira species Toxin-antitoxin system Toxic protein Nuclease activity Cytotoxicity |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
