人caspase-1基因在肝癌细胞中的表达及对IL-1β水平的影响 |
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引用本文: | 林志娟,肖伟玲,王雪净,李青春,梁淑娟.人caspase-1基因在肝癌细胞中的表达及对IL-1β水平的影响[J].中国免疫学杂志,2011,27(1):29-33. |
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作者姓名: | 林志娟 肖伟玲 王雪净 李青春 梁淑娟 |
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作者单位: | 潍坊医学院免疫学教研室,山东省高校免疫学重点实验室,潍坊,261053 |
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基金项目: | 本文为国家自然科学基金,山东省科技攻关计划 |
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摘 要: | 目的:将人caspase-1基因真核表达载体转染肝癌细胞后观察其表达水平及对IL-1β水平的影响,为研究cas-pase-1与IL-1β的关系及其在慢性炎症与肿瘤中的作用提供依据。方法:利用阳离子聚合物(jetPEI)将pIRES2-EGFP-caspase-1重组表达载体和pIRES2-EGFP对照载体转染人肝癌细胞HepG2(HepG2/caspase-1、HepG2/mock),48小时后倒置相差荧光显微镜下观察表达情况,利用RT-PCR、Western blot方法检测两组细胞caspase-1表达水平,采用caspase-1底物显色分析研究的方法检测两组细胞中caspase-1的活性。夹心ELISA法检测细胞培养上清以及细胞裂解液中IL-1β的表达水平。结果:转染48小时后倒置相差显微镜下可见,pIRES2-EGFP-caspase-1和pIRES2-EGFP重组表达载体均能在HepG2细胞中高效表达;HepG2/caspase-1细胞中caspase-1 mRNA表达水平显著提高;经LPS刺激后,HepG2/caspase-1细胞中caspase-1总蛋白的水平明显升高;caspase-1的生物活性水平与对照组相比具有显著性差异(t=25.679,P<0.05);HepG2/caspase-1细胞培养上清中IL-1β的水平明显高于HepG2/mock组细胞(t=3.417,P<0.05),胞浆裂解液中的变化相对不显著(t=2.396,P>0.05)。结论:人caspase-1基因真核表达载体pIRES2-EGFP-caspase-1能够在肝癌细胞中高效表达caspase-1,且该重组表达载体在HepG2细胞中能提高活性IL-1β的表达。
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关 键 词: | caspase-1 肝癌细胞 IL-1β 炎症 |
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