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Elafin真核表达载体的构建及其对气道粘液高分泌的调节
引用本文:余红梅,李琪,尤列·皮尔曼,维克多·科罗索夫,周向东.Elafin真核表达载体的构建及其对气道粘液高分泌的调节[J].中国免疫学杂志,2011,27(5):440-445.
作者姓名:余红梅  李琪  尤列·皮尔曼  维克多·科罗索夫  周向东
作者单位:1. 重庆医科大学附属第二医院呼吸内科,重庆,400010
2. 俄罗斯医学科学院远东呼吸生理与病理研究中心,布拉戈维申斯克,675000
基金项目:国家自然科学基金资助项目,国家自然科学基金中俄国际合作项目,中俄政府间合作项目
摘    要:目的:构建天然内生多肽Elafin真核表达载体,探讨其对气道粘液高分泌的影响。方法:抽提Elafin行RT-PCR获取Elafin cDNA,双酶切后将片段装载到pMD18-T载体上。以pMD18-T-Elafin为模板行PCR反应,产物胶回收并双酶切后定向克隆至pEGFP-N1上,转化,筛选,双酶切鉴定重组质粒。将pEGFP-N1-Elafin转染正常人支气管上皮细胞HBE16,给予脂多糖(LPS)刺激,Western blot检测细胞内Elafin蛋白的相对含量,RT-PCR检测各组Elafin mRNA和粘蛋白(MUC)5AC mRNA表达水平,荧光素酶报告基因检测系统测定核转录因子-κB(NFκ-B)的活性;ELISA法分析各组细胞MUC5AC蛋白的相对含量。结果:成功构建Elafin真核表达载体,转染重组Elafin的HBE16细胞成功表达Elafin蛋白。LPS刺激可增强NF-κB的活性,该活性在转染重组Elafin后显著降低;MUC5AC蛋白含量及mRNA水平在LPS刺激后也显著升高,在转染重组Elafin后二者的表达水平明显降低。结论:Elafin真核表达载体成功构建,初步发现Elafin可通过降低NFκ-B的活性来下调MUC5AC的表达,为进一步深入研究其对气道粘液高分泌的调节机制奠定了基础。

关 键 词:Elafin  粘蛋白  脂多糖  核转录因子-κB

Construction of Eukaryotic expression vector pEGFP-N1-Elafin and its effects on mucus hypersecretion in human airway epithelial cells
YU Hong-Mei,LI Qi,Juliy M·Perelman,Victor P·Kolosov,ZHOU Xiang-Dong.Construction of Eukaryotic expression vector pEGFP-N1-Elafin and its effects on mucus hypersecretion in human airway epithelial cells[J].Chinese Journal of Immunology,2011,27(5):440-445.
Authors:YU Hong-Mei  LI Qi  Juliy M·Perelman  Victor P·Kolosov  ZHOU Xiang-Dong
Institution:YU Hong-Mei,LI Qi,Juliy M·Perelman,Victor P·Kolosov,ZHOU Xiang-Dong.Department of Respiratory Medicine,the Second Affiliated Hospital,Chongqing Medical University,Chongqing 400010,China
Abstract:
Keywords:Elafin
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