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人IL-1β重组表达载体在肝癌细胞的表达及对其NK细胞杀伤敏感性的影响
引用本文:梁淑娟,潘继红,牟东珍,肖伟玲,鞠吉雨.人IL-1β重组表达载体在肝癌细胞的表达及对其NK细胞杀伤敏感性的影响[J].中国免疫学杂志,2007,23(8):688-692.
作者姓名:梁淑娟  潘继红  牟东珍  肖伟玲  鞠吉雨
作者单位:山东省潍坊医学院分子免疫学重点实验室,潍坊,261042
基金项目:山东省优秀中青年科学家科研奖励基金;教育部科学研究项目重点项目;山东省卫生系统重点科技人才基金
摘    要:目的:构建全长人IL-1β真核表达载体,转染H7402肝癌细胞,分析对其NK细胞杀伤敏感性的影响。方法:RT-PCR法扩增人IL-1β基因全长编码序列,经T-A克隆,构建pIRES2-EGFP-IL-1β重组表达载体,采用阳离子聚合物jetPEI的方法转染H7402肝癌细胞,G418筛选获得稳定表达的细胞克隆,RT-PCR分析IL-1β的表达水平,MTT方法分析转染前后NK细胞对肝癌细胞杀伤活性的变化。结果:从LPS处理的人外周PBMCs总RNA中扩增出IL-1β(大小约829 bp),先构建pMD18-IL-1β克隆载体,DNA序列鉴定正确后,利用Pfu DNA聚合酶将IL-1β基因亚克隆到pIRES2-EGFP中,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-IL-1β,经PCR、限制性酶谱分析(BamHⅠ和EcoRⅠ)和DNA序列测定正确后,将其转染H7402肝癌细胞,G418筛选获得稳定表达IL-1β的细胞,与转染空载体的细胞相比,该细胞对NK-92细胞杀伤的敏感性显著降低,效靶比10∶1时下降了约30%。结论:促炎性细胞因子IL-1β能够显著增强肝癌细胞对NK细胞杀伤的抵抗性,可能是导致肝癌细胞发生天然免疫逃逸的重要机制。

关 键 词:IL-1β  肝癌细胞  NK细胞  天然免疫逃逸  促炎性细胞因子
文章编号:1000-484X(2007)0841688-05
修稿时间:2006-11-012007-02-25

Expression of recombinant IL-1β in H7402 cells down-regulated NK cell mediated cytotolysis
LIANG Shu-Juan,PAN Ji-Hong,MU Dong-Zhen,XIAO Wei-Ling,JU Ji-Yu.Expression of recombinant IL-1β in H7402 cells down-regulated NK cell mediated cytotolysis[J].Chinese Journal of Immunology,2007,23(8):688-692.
Authors:LIANG Shu-Juan  PAN Ji-Hong  MU Dong-Zhen  XIAO Wei-Ling  JU Ji-Yu
Institution:Key Laboratory of Molecular Immunology of Shandong Province, Weifang Medical College, Weifang 261042, China
Abstract:
Keywords:
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