| 抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白的构建与表达 |
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| 引用本文： | 代维,刘静,黄鹤,文雪,袁晓梅,雷萍,朱慧芬,沈关心.抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白的构建与表达[J].中国免疫学杂志,2009,25(10). |
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| 作者姓名： | 代维 刘静 黄鹤 文雪 袁晓梅 雷萍 朱慧芬 沈关心 |
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| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院附属同济医院,武汉,430030
2. 华中科技大学同济医学院免疫学系,武汉,430030 |
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| 基金项目： | "863"国家高新技术发展计划，教育部博士点专项资金，新教师基金课题，湖北省卫生厅重点项目资助课题 |
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| 摘 要： | 目的:抗转铁蛋白受体单链抗体(TfR-scFv)-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建与表达.方法:设计两对引物引入连接肽(Gly4Ser)3以及酶切位点HindⅢ和BamH Ⅰ,采用重叠延伸PCR扩增与构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,亚克隆至pEGFP-N1,转染COS-7细胞,倒置相差荧光显微镜下观察荧光蛋白表达,流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清与乳腺癌细胞MCF-7及黑色素瘤细胞A375结合活性.结果:测序表明获得了正确的L-VH-Linker-VL单链抗体基因序列;亚克隆至pEGFP-N1后,表达载体转染COS-7细胞,经荧光显微镜观察转染细胞,及通过流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清,证实抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白在转染细胞中分泌性表达,并能够与天然高表达TfR的细胞特异性结合.结论:抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白真核表达载体构建成功,其表达产物具有与TfR阳性细胞结合的活性.
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| 关 键 词： | 转铁蛋白受体 单链抗体 重叠延伸PCR |
Construction and expression of anti-TfR-scFv-EGFP fusion protein |
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