| 小鼠胚胎整体原位杂交实用技术的建立 |
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| 引用本文： | 吴燕,马子敏,刘淑红,范文红,范明. 小鼠胚胎整体原位杂交实用技术的建立[J]. 解剖学报, 2004, 35(4): 434-436 |
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| 作者姓名： | 吴燕 马子敏 刘淑红 范文红 范明 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院基础医学研究所脑保护与可塑性研究实验室,北京,100850;军事医学科学院基础医学研究所脑保护与可塑性研究实验室,北京,100850;军事医学科学院基础医学研究所脑保护与可塑性研究实验室,北京,100850;军事医学科学院基础医学研究所脑保护与可塑性研究实验室,北京,100850;军事医学科学院基础医学研究所脑保护与可塑性研究实验室,北京,100850 |
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| 基金项目： | 国家 8 63重大专项基金资助项目 ( 2 0 0 2BA711A0 1 0 3 ) |
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| 摘 要： | 目的 优化小鼠胚胎整体原位杂交及数据分析方法。方法 小鼠胚胎用4％多聚甲醛4％固定过夜，10mg／L蛋白酶K(PK)室温消化30min，预杂交2h后，加入探针63℃反应16～18h，用盐溶液高温洗涤多次，RNA酶37℃消化1h，封闭4h后加入地高辛抗体4℃过夜。抗体反应后反复洗涤并在水平摇床上振摇，NBT和BCIP显色系统避光显色。提取图像灰度值，扣除背景、对照等假阳性信号。结果 KIAA1708探针在脑、脊髓等8个区域有杂交信号，对图像数据分析结果表明，只有1个区域的信号在95％可信限范围内，为阳性信号。结论 通过控制蛋白酶K消化时间、探针和地高辛抗体浓度，以及洗涤、显色过程，得到了低本底、着色清晰的杂交结果，结合图像的数据分析步骤，消除假阳性结果。建立了一套实用的小鼠胚胎整体原位杂交方法。
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| 关 键 词： | 方法改进 整体原位杂交 小鼠胚胎 |
ESTABLISHMENT OF WHOLE-MOUNT IN SITU HYBRIDIZATION TO MOUSE EMBRYOS |
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| WU Yan,MA Zi-min,LIU Shu-hong,FAN Wen-hong,FAN Ming. ESTABLISHMENT OF WHOLE-MOUNT IN SITU HYBRIDIZATION TO MOUSE EMBRYOS[J]. Acta Anatomica Sinica, 2004, 35(4): 434-436 |
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| Authors: | WU Yan MA Zi-min LIU Shu-hong FAN Wen-hong FAN Ming |
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| Affiliation: | WU Yan,MA Zi-min,LIU Shu-hong,FAN Wen-hong,FAN Ming * |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Method improvement Whole-mount in situ hybridization Mouse embryos |
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