低剂量唑来膦酸对去势拔牙大鼠破骨及成骨细胞的影响

文题释义：去势大鼠：即通过去势法建立骨质疏松动物模型，该模型建造方法主要有3种：去势法、维甲酸灌胃法和糖皮质激素肌注法，而去势法是目前最常用、最成熟的造模方法，主要是通过去除大鼠双侧卵巢至少3个月，构建骨量少、骨显微结构退化而引起骨脆性增加及骨折发生率升高的一种全身性骨病，即骨质疏松疾病模型。 TUNEL细胞凋亡检测：用于检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况，其原理是生物素标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并可与连接辣根过氧化酶的链霉亲和素特异结合，在显色剂DAB的存在下，产生很强的颜色反应(呈深棕色)，特异准确定位正在凋亡的细胞。 背景：目前唑来膦酸虽能有效地预防绝经后妇女的骨丢失，但其对下颌骨的影响及其机制尚不清楚。 目的：观察去势大鼠经低剂量唑来膦酸作用后下颌骨组织病理学改变，探讨RANKL/RANK/OPG信号系统在唑来膦酸抑制骨吸收过程中的调控效应与机制。 方法：取36只雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组，后2组大鼠行两侧卵巢切除术，建立骨质疏松模型；对照组行假手术去除同等质量卵巢周围的脂肪。去卵巢3个月后，治疗组皮下一次性注射唑来膦酸20 μg/kg，对照组和模型组皮下注射相应剂量的盐水；用药1周后拔除大鼠左侧下颌磨牙，拔牙后4周麻醉动物取出拔牙侧下颌骨组织。通过影像学X 射线大致观察大鼠拔牙窝剩余牙槽骨状况，苏木精-伊红染色检测下颌骨皮质和骨松质的病理结构改变，TUNEL凋亡实验检测凋亡的成骨细胞数量，利用免疫组织化学技术检测下颌牙槽骨内细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL)、骨保护素、细胞核转录因子(NF-κB)的表达情况，最后Western blot检测核因子κB受体活化因子配基、细胞核转录因子蛋白的表达。 结果与结论：①拔牙4周后，治疗组相较模型组牙槽骨骨吸收减少，拔牙窝底有新骨形成；②苏木精-伊红染色可见，模型组的骨皮质变薄，骨小梁结构变细，甚至出现断裂，大量骨吸收陷窝，成骨细胞较少；治疗组骨皮质增厚，骨小梁结构正常，只有少量骨吸收陷窝，成骨细胞增多；③治疗组的成骨细胞凋亡数目显著低于模型组(P < 0.001)；④免疫组织化学染色可见，治疗组RANKL蛋白、NF-KB p65蛋白表达显著低于模型组(P < 0.001，P < 0.002)，骨保护素蛋白表达显著高于模型组(P < 0.001)；⑤Western Blot结果显示，与对照组相比较，模型组的RANKL、NF-κB蛋白高表达，治疗组其表达量显著降低(均P < 0.001)；⑥结果说明，唑来膦酸可通过下调细胞核转录因子信号通路抑制破骨细胞的分化，同时调控成骨细胞的凋亡。 ORCID: 0000-0002-0300-0460(程余婷) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Low-dose zoledronic acid regulates osteoclasts and osteoblasts in the extraction socket of ovariectomized rats