| 汉滩病毒核衣壳蛋白与宿主相互作用蛋白的分离与纯化 |
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| 引用本文： | 刘赫,叶伟,张亮,程林峰,马宏炜,董阳超,雷迎峰,张芳琳.汉滩病毒核衣壳蛋白与宿主相互作用蛋白的分离与纯化[J].细胞与分子免疫学杂志,2019(2):97-102. |
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| 作者姓名： | 刘赫 叶伟 张亮 程林峰 马宏炜 董阳超 雷迎峰 张芳琳 |
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| 作者单位： | 空军军医大学微生物与病原生物学教研室 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2016YFC1200400);国家自然科学基金(31600131) |
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| 摘 要： | 目的构建带有亲和素标签的汉滩病毒(HTNV)核衣壳蛋白(NP)表达质粒,转染HEK293T细胞并表达后,鉴定与其相互作用的宿主蛋白。方法合成亲和素标签基因(SF)与HTNV NP基因,先后克隆入哺乳动物真核表达载体pCAGGS,构建带有亲和标签SF的HTNV NP表达质粒,酶切鉴定重组质粒,获得的重组质粒命名为pCAGGS-SF-NP。将重组表达质粒瞬时转染到HEK293T细胞中, Western blot法检测重组质粒的表达;瞬时转染并收获蛋白样品,与StrepTrapTM HP琼脂珠混匀后, 4℃过夜孵育;转移到层析柱中,经缓冲液洗涤、脱硫生物素洗脱完成亲和层析,获得洗脱样本;洗脱样品进行SDS-PAGE,分离得到与NP相互作用的宿主蛋白。结果酶切鉴定结果表明成功构建pCAGGS-SF和pCAGGS-SF-NP,重组质粒成功表达串联SF与NP的融合蛋白;在亲和层析过程中,成功特异富集融合蛋白SF-NP;洗脱样品成功分离出与NP相互作用的宿主蛋白。结论构建的重组表达质粒可以在真核细胞中成功表达融合蛋白SF-NP并获得了与NP相互作用的宿主蛋白。
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| 关 键 词： | 汉滩病毒 核衣壳蛋白 亲和纯化 |
Isolation and purification of host factors interacting with Hantaan virus nucleocapsid protein |
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| Institution: | (Department of Microbiology and Pathogen Biology, School of PrecEnical Medicine, Air Force Military Medical University, Xi'an 710032, China) |
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| Abstract: | UU He;YE Wei;ZHANG Liang;CHENG Linfeng;MA Hongwei;DONG Yangchao;LEI Yingfeng;ZHANG *FangHn(Department of Microbiology and Pathogen Biology, School of PrecEnical Medicine, Air Force Military Medical University, Xi'an 710032, China) |
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| Keywords: | Hantaan virus (HTNV) nucleocapsid protein (NP) affinity purification |
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