| GAP-43原核表达载体的构建、表达及抗GAP-43单克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 段小莉,黄文晋,王百忍,宋俊峰,金卫林,郭翔,鞠躬.GAP-43原核表达载体的构建、表达及抗GAP-43单克隆抗体的制备[J].细胞与分子免疫学杂志,2003,19(5):480-482. |
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| 作者姓名： | 段小莉 黄文晋 王百忍 宋俊峰 金卫林 郭翔 鞠躬 |
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| 作者单位： | 第四军医大学神经科学研究所,陕西,西安,710032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学重点项目资助 (No.39860 1 30 ) |
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| 摘 要： | 目的：原核表达神经生长相关蛋白-43(GAP-43)，并制备抗GAP-43的单克隆抗体(mAb)。方法：从含有GAP-43 cDNA的质粒中，用PCR扩增GAP-43 cDNA的全长编码序列，克隆人表达载体pGEX-4T-1中，构建GAP-43的高表达工程菌，并以IPTG诱导表达日的蛋白。通过亲和层析法纯化表达的GST-GAP-43融合蛋白，并以此为抗原制备mAb。结果：酶切鉴定证明，获得含有目的基因片段的重组质粒.表达的GST-GAP-43融合蛋白以可溶性的形式存在。ELISA检测表明，获得的抗GAP-43 mAB效价为1：10^8，其IgG的亚类为IgG2a，亚型为κ型。用Western blot检测大鼠脑匀浆蛋白，在相对分子质量(Mr)为50000处有一条特异性带。用此mAb进行荧光免疫法检测表明，在致敏豚鼠的肺切片中，有GAP-43阳性的神经纤维。结论：所获抗GAP-43mAb的特异性强、效价高，对进一步研究(GAP-43在神经系统中的作用提供了有用的试剂。
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| 关 键 词： | GAP-43 原核表达 单克隆抗体 制备 |
| 文章编号： | 1007-8738(2003)05-480-03 |
| 修稿时间： | 2002年8月26日 |
Construction and expression of prokaryotic expression vector and preparation of monoclonal antibody against GAP-43 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | GAP 43 prokaryotic expression monoclonal antibody |
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