| 小鼠抗人磷脂酰肌醇3激酶相互作用蛋白1单克隆抗体的制备和鉴定 |
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| 引用本文： | 常莹,许冬,陈瑶瑶,莫小宁,许兰俊,陈英玉.小鼠抗人磷脂酰肌醇3激酶相互作用蛋白1单克隆抗体的制备和鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2010,26(5). |
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| 作者姓名： | 常莹 许冬 陈瑶瑶 莫小宁 许兰俊 陈英玉 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，科技部"重大新药创制"科技重大专项资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:制备鼠抗人磷脂酰肌醇3激酶相互作用蛋白1(PIK3IP1)的单克隆抗体(mAb),探讨PIK3IP1蛋白的结构和功能.方法:利用重组蛋白GST-PIK3IP162-168为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗人PIK3IP1蛋白mAb的杂交瘤细胞株,通过ELBA,Western blot和免疫荧光技术等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了1株稳定分泌抗PIK3IP1蛋白的mAb杂交瘤细胞株,命名为5C6,其免疫球蛋白亚类为IgG1.ELISA检测的腹水效价可达1:107.5C5 mAb与重组GST-PIK3IP162-168蛋白有较强的特异性反应,而与大肠杆菌裂解液以及谷胱苷肽2S转移酶(GST)没有交叉反应.同时,5C6 mAb也能特异性地结合真核细胞超表达的全长PIK3IP1蛋白和变异体PIK3IP1-v1,但检测不到内源性的PIK3IP1蛋白.共聚焦免疫荧光显微镜结果显示PIK3IP1和PIK3IP1-v1定位于胞质,在胞质中呈现不均一的斑点状分布.结论:获得了效价高、特异性好的PIK3IP1蛋白的mAb,为进一步研究PIK3IP1的生物学功能提供了有用的工具.
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| 关 键 词： | 蛋白质 PIK3IP1 抗体 单克隆 杂交瘤 |
Generation and characterization of monoclonal antibody against human PIK3IP1 |
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| CHANG Ying,XU Dong,CHEN Yao-yao,MO Xiao-ning,XU Lan-jun,CHEN Ying-yu.Generation and characterization of monoclonal antibody against human PIK3IP1[J].Journal of Cellular and Molecular Immunology,2010,26(5). |
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| Authors: | CHANG Ying XU Dong CHEN Yao-yao MO Xiao-ning XU Lan-jun CHEN Ying-yu |
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