| 猪带绦虫Ts14-3-3.3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 罗波,李想,周必英.猪带绦虫Ts14-3-3.3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J].中国人兽共患病杂志,2019,35(12):1100-1105. |
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| 作者姓名： | 罗波 李想 周必英 |
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| 作者单位： | 遵义医科大学寄生虫学教研室,遵义 563000 |
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| 基金项目： | 贵州省科技计划项目(黔科合基础[2018]1190)和省市科技合作专项资金项目(省市科合[2015]52)联合资助 |
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| 摘 要： | 目的 建立猪带绦虫Ts14-3-3.3蛋白原核表达系统并制备兔多克隆抗体。方法 通过逆转录PCR(RT-PCR)技术将猪囊尾蚴总RNA反转录为cDNA,利用特异性引物扩增猪带绦虫Ts14-3-3.3基因,将其克隆至原核表达质粒pCznⅠ中,在大肠杆菌Arctic Express中用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析其表达产物,用HisLink亲和层析柱进行纯化,免疫印迹(Western blot)法鉴定纯化后的Ts14-3-3.3重组蛋白。将纯化的Ts14-3-3.3重组蛋白免疫新西兰兔,制备Ts14-3-3.3多克隆抗体,Western blot和免疫组化法检测Ts14-3-3.3天然蛋白在猪带绦虫成虫和囊尾蚴的分布。结果 成功构建猪带绦虫重组表达质粒pCznⅠ-Ts14-3-3.3,经IPTG诱导表达,获得可溶性形式高效表达的Ts14-3-3.3重组蛋白,分子质量约29.31 kD,纯化后带有His标签的Ts14-3-3.3重组蛋白能被抗血清所识别。用纯化的Ts14-3-3.3重组蛋白免疫新西兰兔,获得了Ts14-3-3.3多克隆抗体,其效价为1∶512 000。Western blot和免疫组化结果显示,Ts14-3-3.3天然蛋白在猪带绦虫成虫和囊尾蚴中均有表达。结论 成功制备猪带绦虫重组Ts14-3-3.3蛋白,并获得了高纯度、高效价的兔多克隆抗体。
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| 关 键 词： | 猪带绦虫 Ts14-3-3.3蛋白 原核表达 多克隆抗体 |
| 收稿时间： | 2019-04-03 |
Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of Ts14-3-3.3 protein of Taenia solium |
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| LUO Bo,LI Xiang,ZHOU Bi-ying.Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of Ts14-3-3.3 protein of Taenia solium[J].Chinese Journal of Zoonoses,2019,35(12):1100-1105. |
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| Authors: | LUO Bo LI Xiang ZHOU Bi-ying |
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| Institution: | Department of Parasitology,Zunyi Medical University,Zunyi 563000,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Taenia solium Ts14-3-3 3 protein prokaryotic expression polyxlonal antibody |
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