| 基于PiggyBac转座系统的CD19-CAR载体的构建及功能鉴定 |
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| 作者姓名： | 姜淇耀 史甲儒 罗志强 周雅婷 和似琦 于国华 王建勋 |
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| 作者单位： | 1. 北京中医药大学 生命科学学院,北京 102488;2. 中国中医科学院 中药资源中心,道地药材国家重点实验室,北京 100700;3. 深圳北京中医药大学研究院,广东 深圳 518118 |
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| 基金项目： | 北京市双一流高层次人才科研启动经费资助项目（No.9011451310032）;北京中医药大学新教师启动基金资助项目（No.1000061223998） |
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| 摘 要： | 目的：开发基于PiggyBac(PB)转座系统的电转染CAR-T细胞制备方法并鉴定其体外抗肿瘤功能。方法：采用健康人外周血单个核细胞（PBMC）制备T细胞,通过分子克隆技术将CD19基因克隆到PB质粒（转座子）中后经电转染法将转座子和转座酶质粒导入激活的T细胞中,并测定其转染效率,最后运用流式细胞术及荧光素酶发光实验评估其对人Burkitt’s淋巴瘤Raji细胞的杀伤能力。结果：电转染制备的CD19 CAR-T细胞转染效率较高（>60%）,呈剂量依赖性,且CAR-T细胞相对于Pan-T细胞对Raji细胞杀伤能力显著（P<0.05）。结论：开发的PB转座系统的电转染方法可行,在体外对肿瘤细胞具有显著的杀伤能力,具备临床运用于CD19 CAR-T细胞制备的潜力。
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| 关 键 词： | CAR-T细胞 CD19 PB转座系统 电转染 淋巴瘤 Raji细胞 |
| 收稿时间： | 2022-08-12 |
| 修稿时间： | 2022-11-24 |
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