内皮祖细胞作为干扰素基因载体靶向肿瘤的实验研究

目的:探讨人间充质干细胞(MSCs)诱导成内皮祖细胞(EPCs),作为携带人伽玛干扰素(hγIFN)基因的载体进行肿瘤免疫治疗的可行性.方法:分离和培养人MSCs,在体外经人血管内皮生长因子(VEGF165,20ng/ml)诱导2周后,用流式细胞仪检测细胞表面标志.用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因作为报告基因,检测腺病毒载体(Ad5-EGFP)对EPCs的感染效率.AdS-hγIFN转染EPCs(EPcs-hγIFN),ELISA法检测EPCs-hγIFN培养上清液中hγIFN浓度.体外EPCs-hγIFN与Lovo结肠癌细胞混合培养,观察对肿瘤细胞的抑制作用.给荷瘤裸鼠静脉注射EPCs-EGFP,观察EPCs的体内分布特点.给荷瘤裸鼠静脉注射EPCs-hγIFN,观察对移植瘤的抑制作用和对存活期的影响.结果:MSCs用VEGF165诱导2周后,分化成CD133、KDR和CD34阳性的EPCs.AdS-EGFP在感染复数(MOI)为150pfu/EPC时,EGFP阳性的EPCs可达95%以上.EPCs-hγIFN培养液中测得hγIFN,浓度达1400pg/ml以上,而且在一段时间内浓度保持稳定.EPCs-hγIFN与Lovo细胞按照1:5的浓度混合培养4天,对Lovo细胞的抑制率为30.48%±3.78%(P＜0.05).通过静脉注射的EPCs-EGFP主要分布在肿瘤组织,而非其他器官组织.尾静脉注射EPCs-hγIFN可以抑制肿瘤的生长(肿瘤重量:EPCs-hγIFN组0.48±0.78g,空白对照组2.47±2.58g,P＜0.05),而皮下注射hγyIFN和静脉注射EPCs-EGFY对肿瘤无抑制作用.尾静脉注射EPCs-hγIFN延长荷瘤裸鼠的存活时间(中位存活时间:EPCs-hγIFN组为35天,空白对照组为32夭,P＜0.05).结论:EPCs可以靶向性的分布到肿瘤局部,可以作为免疫性基因载体在肿瘤治疗领域进行进一步的研究.

Endothelial Progenitor Cells as Targeted Antitumor Vectors for Human Gamma Interferon Gene