| 重组腺病毒载体Ad5-Olig1-eGFP的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 赵红,王苏平,张拥波,王得新. 重组腺病毒载体Ad5-Olig1-eGFP的构建与鉴定[J]. 实用医学杂志, 2012, 28(4): 526-529. DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2012.04.003 |
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| 作者姓名： | 赵红 王苏平 张拥波 王得新 |
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| 作者单位： | 1. 辽宁省大连市中心医院神经内科,116033
2. 首都医科大学附属北京友谊医院神经内科,北京市,100050 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，北京市自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:转录因子Olig1调控了少突胶质前体细胞的分化和成熟,并参与了脱髓鞘损伤后的修复,是治疗脱髓鞘疾病的候选基因,在缺血性脑血管病的治疗中具有极大的应用价值。本实验旨在构建携带Olig1基因的重组腺病毒载体。方法:pDC315-Olig1为模板,聚合酶链反应扩增酶切Olig1片段,连接到带有eGFP标记基因的载体质粒pDC315-eGFP上,构建穿梭质粒pDC315-Olig1-eGFP,经PCR,酶切及测序鉴定后,利用AdMax包装系统,通过脂质体2000的介导与骨架质粒pBHGlox_E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组后产生复制缺陷型重组腺病毒载体Ad5-Olig1-eGFP,应用PCR对毒种进行鉴定,传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒。以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度。结果:经聚合酶链反应,酶切鉴定和测序分析,得到大小700bp(Olig1)目的片段,证实正确构建重组穿梭质粒pDC315-Olig1-eGFP和重组腺病毒Ad5-Olig1-eGFP,测得重组腺病毒颗粒数为2.3×1011v.p./mL。结论:成功构建携带Olig1的重组腺病毒载体Ad5-Olig1-eGFP,为缺血性脑血管病的基因治疗提供基因载体并奠定实验基础。
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| 关 键 词： | 脑血管障碍 腺病毒载体 Olig1 基因重组 |
Construction and identification of recombinant adenovirus vector Ad5-Olig1-eGFP |
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| ZHAO Hong,WANG Su-ping,ZHANG Yong-bo,WANG De-xin. Construction and identification of recombinant adenovirus vector Ad5-Olig1-eGFP[J]. The Journal of Practical Medicine, 2012, 28(4): 526-529. DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2012.04.003 |
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| Authors: | ZHAO Hong WANG Su-ping ZHANG Yong-bo WANG De-xin |
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| Affiliation: | .*Department of Neurology,Dalian Municipal Central Hospital,Liaoning 116033,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cerebrovascular disorders Adenovirus vector Olig1 Gene cloning |
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