NONO基因沉默对乳腺癌细胞生物学特性影响研究

目的 无POU域八聚体结合蛋白(non-POU domain containing octamer-binding protein,NONO)是一种参与多种核内事件的多功能核蛋白,NONO与某些肿瘤的发生密切相关.本研究旨在探讨NONO基因沉默对乳腺癌细胞(SKBR3)增殖、迁移和侵袭生物学特性的影响.方法 用含有靶向人NONO基因shRNA的慢病毒感染SKBR3细胞,并用嘌呤霉素进行筛选,通过蛋白质印迹法检测SKBR3细胞中NONO蛋白表达,建立稳定的NONO基因沉默的SKBR3细胞系;采用CCK-8法和平板克隆实验检测NONO基因沉默对SKBR3细胞增殖的影响;通过体外Transwell迁移和侵袭实验检测NONO基因沉默对SKBR3细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 蛋白质印迹法实验结果显示,SKBR3、NONO基因沉默的SKBR3(SKBR3-NONO-si)和阴性对照SKBR3(SKBR3-NC)组细胞NONO蛋白表达相对灰度值分别为0.716 7±0.225、0.103±0.045和0.727±0.127,差异有统计学意义,F=16.699,P=0.004,表明成功地建立了稳定的NONO基因沉默的SKBR3细胞系.CCK-8实验结果显示,细胞接种后7d,SKBR3、SKBR3-NONO-si和SKBR3-NC细胞CCK-8吸光度值分别为1.717±0.233、0.566±0.158和1.110±0.187,差异有统计学意义,F=78.469,P＜0.001;平板克隆形成实验结果显示,细胞培养14 d后,SKBR3、SKBR3-NONO-si和SKBR3-NC组形成的克隆数分别为64.667±14.84、21.167±7.414和53.667±11.587,差异有统计学意义,F=16.333,P＜0.001;以上结果均说明,NONO基因沉默抑制SKBR3细胞增殖能力.Transwell迁移实验结果显示,细胞接种后20 h,SKBR3、SKBR3NONO-si和SKBR3-NC组迁移细胞数分别为62.333±7.767、44.667±7.637和85.333±11.930,差异有统计学意义,F=14.338,P=0.005;侵袭实验结果显示,细胞接种后40 h,SKBR3、SKBR3-NONO-si和SKBR3-NC组侵袭细胞数分别为27.667±7.024、24.666±3.512和81.000±5.568,差异有统计学意义,F=97.558,P＜0.001;与SKBR3-NC细胞相比,NONO基因沉默的SKBR3-NONO-si细胞迁移和侵袭能力均明显降低.结论 NONO基因沉默抑制SKBR3细胞增殖、迁移和侵袭,提示NONO可能是促进乳腺癌细胞增殖、转移和侵袭一个新的重要调控蛋白.

Effects of NONO silencing on the biological characteristics of breast cancer cells