中药复方对急性髓细胞性白血病干细胞Flt3和N-ras基因表达的影响

背景：在白血病患者体内存在一群白血病干细胞，这些恶性干细胞是白血病细胞存在和不断增殖的根源，针对干预白血病干细胞的特异性靶向治疗药物已成为近年来研究热点。 目的：探讨中药复方对急性髓细胞性白血病干细胞Flt3和N-ras基因表达的影响。 设计、时间及地点：随机区组实验，于2007-09/2008-12在山东中医药大学附属医院完成。 对象：2006-2007年山东中医药大学附属医院、山东大学齐鲁医院血液科就诊的急性髓细胞性白血病初治患者50例，FAB分型M1 5例，M2 15例，M4 9例，M5 21例。 方法：原方：黄芪、白花蛇舌草、小蓟、太子参、半枝莲、蒲公英、生地、黄精、女贞子、旱莲草、天冬、麦冬、白术、茯苓、甘草。扶正方：黄芪、太子参、生地、黄精、女贞子、天冬、麦冬、白术、茯苓、甘草。祛邪方：白花蛇舌草、小蓟、半枝莲、蒲公英、旱莲草。制剂：上述3组组方药物由山东中医药大学附属医院中药制剂实验室(国家三级重要制剂实验室)配制成1 g/mL的药液，无菌试验阴性后过滤除菌备用。常规无菌采集急性髓细胞性白血病M1，M2，M4，M5型患者骨髓各5 mL，稀释后加入淋巴细胞分离液，联合应用免疫磁珠分选系统和流式细胞仪分离纯化白血病干细胞。调整细胞浓度至2×108 L-1，均分成4组：对照组不加药物，实验组分别加入原方、扶正方、祛邪方的对应中药制剂，终浓度为100 mg/L，继续培养48 h后进行指标检测。 主要观察指标：RT-PCR法检测Flt3、N-ras基因的表达。 结果：与对照组比较，原方组、扶正方组、祛邪方组Flt3表达阳性率均明显降低(P < 0.05)，但原方组降低幅度明显大于扶正方组、祛邪方组(P < 0.05)；扶正方组与祛邪方组Flt3表达阳性率比较无明显差异(P > 0.05)。4组N-ras表达阳性率与Flt3表达情况基本一致。 结论：Flt3和N-ras基因在白血病干细胞中存在过度表达，中药原方及其拆方后的扶正方、祛邪方均能够降低白血病干细胞中Flt3和N-ras基因的表达水平。