siRNA抑制HPV18 E6 基因对HeLA细胞凋亡的影响

目的 研究特异小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA)对宫颈癌HeLa细胞中人乳头瘤病毒（human papillomavirus, HPV）18型 E6基因的抑制及其对细胞凋亡的影响。方法 针对HPV18 E6 基因设计siRNA序列，经PCR方法体外扩增，得到含有U6启动子以及siRNA序列的PCR产物，利用LipofectamineTM2000脂质体转染HeLa细胞，在U6启动子的作用下于细胞内转录siRNA。针对转染后不同时间点采用四唑盐（MTT）比色法测定细胞活力，流式细胞仪PI染色法检测细胞凋亡率，RT-PCR测定HPV18 E6 mRNA变化。结果 转染siRNA后细胞活力受到显著抑制（P＜0.05），光镜下出现明显的凋亡形态，72h 的凋亡率达到55.8%。RT-PCR结果显示，细胞转染24、48和72h后HPV18 E6 mRNA分别减少了57％、78％和40%，而siRNA阴性对照与未转染细胞相比差异不显著。结论 siRNA可特异有效的干扰宫颈癌HeLa 细胞内HPV18 E6基因的表达，从而可诱导肿瘤细胞凋亡。