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| 人胰岛素样生长因子I基因转染骨髓基质细胞的实验研究 | |
| 引用本文： | 张海宁,侯筱魁,汤亭亭,冷萍. 人胰岛素样生长因子I基因转染骨髓基质细胞的实验研究[J]. 中华外科杂志, 2005, 43(4): 263-267 |
| 作者姓名： | 张海宁 侯筱魁 汤亭亭 冷萍 |
| 作者单位： | 1. 200011,上海第二医科大学附属第九人民医院骨科 2. 山东大学药学院 |
| 摘 要： | 目的检测人胰岛样生长因子Ⅰ基因转染骨髓基质细胞的效果及目的基因的表达情况,寻找一种改良组织工程种子细胞的新方法。方法抽取成年雄性山羊髂嵴骨髓,贴壁分离法接种培养骨髓基质细胞,检测细胞生长特性。取第2代细胞,按3∶1比例用FuGene6转染试剂介导,将重组真核表达质粒pIRES2 EGFP hIGF Ⅰ(EGFP为增强绿色荧光蛋白,hIGF Ⅰ为人胰岛素样生长因子Ⅰ)转染骨髓基质细胞,转染后4~72h和传代后分别用倒置荧光显微镜观察标志基因增强绿荧光蛋白的表达情况,计算转染效率。酶联免疫吸附试验检测培养上清液中hIGF Ⅰ的浓度变化。转染细胞爬片行hIGF Ⅰ免疫组化染色检测hIGF Ⅰ的表达。提取转染后48h的细胞总RNA,RT PCR检测hIGF Ⅰ和内核糖体进入位点(IRES)的表达。收集转染前及转染后48h的细胞行流式细胞仪检测细胞周期分布及荧光表达情况。结果成年山羊骨髓基质细胞在接种后24h开始贴壁,伸展成长梭形,原代细胞呈集簇状分布。在转染后4h即有细胞表达绿色荧光蛋白,荧光强度和表达细胞总数在48h达高峰, 72h时见部分细胞荧光强度下降,传代后仍可观察到EGFP的表达。转染后4~72h转染上清液中分泌hIGF Ⅰ的浓度呈逐渐上升趋势,在72h最高可达34 75ng/ml。转染后部分细胞形态发生变化。hIGF Ⅰ免疫组化染色证实在胞浆中 |
| 关 键 词： | 骨髓细胞 受体 IGF-Ⅰ型 基因 转染 |
| 修稿时间： | 2004-04-19 |
Experimental research on human insulin-like growth factor Ⅰ gene transfect the cultured bone marrow mesenchymal stem cells |
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