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| 携带RGD多肽的嵌合型腺病毒载体AD11-RGD-4C-EGFP的构建及其感染效率的研究 | |
| 引用本文： | 刘辉,王春红,陈亚龙,李林芳,吴红平,钱炎珍,姜梨华,钱其军.携带RGD多肽的嵌合型腺病毒载体AD11-RGD-4C-EGFP的构建及其感染效率的研究[J].第二军医大学学报,2010,31(2):178-182. |
| 作者姓名： | 刘辉 王春红 陈亚龙 李林芳 吴红平 钱炎珍 姜梨华 钱其军 |
| 作者单位： | 1. 浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所,杭州310018;第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室,上海200438 2. 第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室,上海,200438 3. 浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所,杭州,310018 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金重点项目(30730104);;浙江省自然基金重点项目(Z205618)~~ |
| 摘 要： | 目的在嵌合型腺病毒的fiber中插入具有整合素特异性的RGD肽,构建可提高腺病毒感染效率的腺病毒载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2、BEL-7404以及成纤维细胞BJ的感染效率。方法将RGD-4C插入到AD5/11嵌合型腺病毒载体fiber的HI区,与腺病毒骨架质粒pPE3共转染大肠杆菌BJ5183,同源重组产生腺病毒重组质粒(pPE3-F11-RGD-4C),该重组质粒与PDC328-EF1-EGFP共转染人胚肾293细胞进行包装,产生重组腺病毒(AD11-RGD-4C-EG-FP)。用该重组腺病毒感染HepG2、BEL-7404以及BJ细胞,通过荧光显微镜观察感染效率。结果所构建的重组腺病毒PCR扩增出1 123 bp包含目的片段的基因片段。同时,制备了高滴度的重组病毒,纯化后病毒滴度为1.3×1010pfu/ml。当MOI=10,48 h时该重组病毒对HepG2、BEL-7404及BJ细胞的感染效率明显高于对照组腺病毒(AD11-EGFP)。结论成功构建了可提高腺病毒感染效率的嵌合型腺病毒(AD11-RGD-4C-EGFP),为进一步的研究奠定了基础。 |
| 关 键 词： | RGD-4C HI环 腺病毒载体 肝细胞癌 |
| 收稿时间： | 2009/2/16 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2009/10/19 0:00:00 |
Construction and transfection efficiency analysis of 5/11 chimeric adenovirus harboring RGD-4C |
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| LIU Hui,WANG Chun-hong,CHEN Ya-long,LI Lin-fang,WU Hong-ping,QIAN Yan-zhen,JIANG Li-hu,QIAN Qi-jun.Construction and transfection efficiency analysis of 5/11 chimeric adenovirus harboring RGD-4C[J].Academic Journal of Second Military Medical University,2010,31(2):178-182. | |
| Authors: | LIU Hui WANG Chun-hong CHEN Ya-long LI Lin-fang WU Hong-ping QIAN Yan-zhen JIANG Li-hu QIAN Qi-jun |
| Institution: | 1. XinYuan Institute of Medicine and Biotechnology, College of Life Science, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018, Zhejiang, China;2. Laboratory of Viral and Gene Therapy, Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200438, China |
| Abstract: | Objective To construct a 5/11 chimeric adenovirus harboring RGD-4C,and observe its transfection efficiency after transfecting it into hepatocarcinoma cell lines HepG2,BEL-7404 and BJ cells.Methods RGD-4C was inserted into the HI loop region of 5/11 chimeric adenovirus fiber gene and the insertion outcome was confirmed by enzyme digestion and PCR analysis.The confirmed plasmid was co-transfected into E.coli BJ5183 together with adenoviral backbone plasmid pPE3 to produce recombinant plasmid by homologous rec... |
| Keywords: | RGD-4C HI loop adenovirus vectors hepatocarcinoma |
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