| 慢病毒载体介导HIF1α稳定表达A549细胞系构建 |
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| 引用本文： | 邹斌,周学亮,詹宇亮,陈紫晴,赖松青,吴霞,刘季春.慢病毒载体介导HIF1α稳定表达A549细胞系构建[J].重庆医学,2017,46(20). |
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| 作者姓名： | 邹斌 周学亮 詹宇亮 陈紫晴 赖松青 吴霞 刘季春 |
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| 作者单位： | 1. 南昌大学第一附属医院心胸外科,南昌,330006;2. 南昌大学第一附属医院心血管内科,南昌,330006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 利用慢病毒载体系统构建稳定表达HIF1α的A549细胞系.方法 以NCBI人HIF1α基因编码序列为模板,设计并合成引物,PCR法扩增HIF1α.酶切回收的HIF1α片段与制备的慢病毒载体HBLV-RFP-Puro重组反应.PCR和基因测序鉴定重组质粒.重组质粒和辅助质粒共转染293T细胞.包装好的病毒经过滤、浓缩后,利用稀释计数法测定病毒滴度.制备好的慢病毒感染A549细胞,采用药物筛选稳定转染细胞系.荧光显微镜及Western blot检测观察转染及筛选效果.结果 PCR扩增HIF1α片段经鉴定成功,重组质粒经PCR、基因测序鉴定构建成功.成功包装获得高滴度LV-HIF1α.LV-HIF1α感染A549细胞后经药物筛选,荧光显微镜下细胞带有红色荧光,Western blot结果显示LV-HIF1α组HIF1α的表达水平明显高于对照组.结论 慢病毒载体介导HIF1α稳定表达的A549细胞系构建成功.
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| 关 键 词： | HIF1α 慢病毒载体 稳定表达 A549 |
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