| 小鼠微小RNA miR-22真核表达载体的构建及功能初步研究 |
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| 引用本文： | 张炜炜,王涛,艾国平,粟永萍,王军平,邹仲敏,邓均,董世武.小鼠微小RNA miR-22真核表达载体的构建及功能初步研究[J].第三军医大学学报,2007,29(9):803-805. |
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| 作者姓名： | 张炜炜 王涛 艾国平 粟永萍 王军平 邹仲敏 邓均 董世武 |
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| 作者单位： | 第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室,全军复合伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划) |
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| 摘 要： | 目的 从基因组DNA扩增miR-22前体对应的基因组片段并克隆到pIRES2-EGFP,构建miR-22的真核表达载体.方法 利用PCR技术从基因组DNA扩增miR-22前体对应的基因组片段,克隆到质粒pUCm-T,测序正确后构建到真核表达载体pIRES2-EGFP中,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定,并进行序列测定.脂质体Lipofectamin 2000法转染Hela细胞后G418筛选获得稳定转染克隆,提取总RNA,通过RT-PCR方法对neo片段进行鉴定,采用Northern blot技术检测miR-22的表达.结果 PCR扩增得到的334 bp片段与预期的miR-22前体对应的基因组片段序列一致;成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP/miR-22,测序结果正确.重组质粒转染Hela细胞后,经G418筛选成功获得阳性克隆.Northern blot分析显示miR-22在Hela细胞内高效表达.结论 本实验成功克隆了miR-22的前体对应的基因组片段,构建其真核表达载体,并在Hela细胞内获得高表达,为深入研究微小RNA miR-22的功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | 微小RNA 真核表达载体 基因组片段 |
| 文章编号： | 1000-5404(2007)09-0803-03 |
| 修稿时间： | 2006年10月25 |
Construction of eukaryotic expression vector of mouse microRNAs miR-22 |
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| ZHANG Wei-wei,WANG Tao,AI Guo-ping,SU Yong-ping,WANG Jun-ping,ZOU Zhong-min,DENG Jun,DONG Shi-wu.Construction of eukaryotic expression vector of mouse microRNAs miR-22[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2007,29(9):803-805. |
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| Authors: | ZHANG Wei-wei WANG Tao AI Guo-ping SU Yong-ping WANG Jun-ping ZOU Zhong-min DENG Jun DONG Shi-wu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | miR-22 Hela Northernblot |
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