藏药二十五味鬼臼丸对金黄色葡萄球菌的抑菌作用及机制研究

目的 研究藏药二十五味鬼臼丸对金黄色葡萄球菌的抑菌作用，初步探讨相关抑菌机制。方法 采用琼脂平板打孔法，测定二十五味鬼臼丸（50、100、200mg·mL^-1）对金黄色葡萄球菌的抑菌圈大小。通过微量肉汤稀释法，测定最小抑菌浓度（MIC）。调整肉汤培养基中的二十五味鬼臼丸浓度为0.5MIC、1.0MIC和2.0MIC，分别加入1.0×10⁸CFU·mL^-1菌悬液，以不含药液而含菌量相同的培养基作为对照组，在37℃、120r·min^-1恒温培养箱中振荡培养，每小时取样，用紫外可见分光光度计在600nm处测定吸光度（A₆₀₀）值，绘制细菌的生长曲线；每2小时取样，离心取上清液，试剂盒法测定碱性磷酸酶（AKP）活性；每小时取样，离心取上清液，用紫外可见分光光度计在260nm处测定A₂₆₀值，以A₂₆₀值表示DNA/RNA大分子相对量；每小时取样，离心取上清液，加入考马斯亮蓝G250溶液，于595nm处测定A₅₉₅值，检测胞外可溶性蛋白含量；培养8h后，离心留沉淀，进行SDS-PAGE电泳，检测菌体蛋白含量。结果 二十五味鬼臼丸50、100、200mg·mL^-1对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为（12.33±0.75）、（16.33±0.41）、（19.17±0.68）mm；对金黄色葡萄球菌的MIC为100mg·mL^-1；与对照组相比，二十五味鬼臼丸组的金黄色葡萄球菌生长显著减缓（P＜0.05），胞外的AKP活性显著升高（P＜0.05），胞外DNA/RNA大分子相对量显著升高（P＜0.01），胞外可溶性蛋白含量显著升高（P＜0.01），菌体总蛋白表达量明显减少。结论 二十五味鬼臼丸对金黄色葡萄球菌具有抑菌作用，其抗菌作用可能与致细菌细胞壁、细胞膜结构破损，且对菌体蛋白具有一定抑制作用有关。

Study on antibacterial effects and mechanism of Tibetan medicine Ershiwuwei Guijiu Pills on Staphylococcus aureus