基于PI3K/Akt/mTOR通路探讨助卵汤对大鼠早发性卵巢功能不全的保护作用机制

目的 观察助卵汤对环磷酰胺诱导的早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢储备功能的影响，并基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路探讨助卵汤对大鼠早发性卵巢功能不全的保护机制。方法 60只雌性SD大鼠随机分为正常组10只，模型组50只，模型组采用环磷酰胺（第1天50 mg·kg^-1负荷剂量+第2~15天8 mg·kg^-1小剂量维持）腹腔注射进行造模，造模成功后随机分为模型组、阳性药物补佳乐组（0.1 mg·kg^-1·d^-1）、助卵汤低、中、高剂量组（14、28、56 g·kg^-1·d^-1），每组10只，模型组与正常组予以等体积蒸馏水灌胃，每日1次，连续给药21 d。检测各组大鼠动情周期、体质量，计算卵巢脏器指数与子宫脏器指数，苏木素-伊红（HE）染色检测卵巢组织病理情况及卵巢切面各级卵泡计数，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清抗苗勒激素（AMH）、促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）、抑制素-B（INH-B）激素含量，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠卵巢组织PI3K、Akt、mTOR蛋白表达，免疫组化检测大鼠卵巢组织微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）蛋白的表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠动情周期紊乱，体质量及卵巢脏器指数与子宫脏器指数减少，原始卵泡数量减少，次级卵泡和闭锁卵泡数量增多，FSH升高（P<0.01），LH升高（P<0.05），AMH水平下降（P<0.05），卵巢组织PI3K、Akt、mTOR蛋白表达量均降低（P<0.01），LC3B蛋白表达量显著增加（P<0.01）；与模型组比较，补佳乐和助卵汤各剂量组上述指标均改善，AMH含量升高（P<0.05），FSH降低（P<0.05），LC3B蛋白表达量显著降低（P<0.01），PI3K、Akt、mTOR蛋白表达量均有升高趋势，且补佳乐组和助卵汤低、中剂量组升高差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 助卵汤可能通过激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制卵巢颗粒细胞过度自噬的发生，从而逆转造模对大鼠卵巢储备功能的影响。

Protective Mechanism of Zhuluan Decoction in Rats with Premature Ovarian Insufficiency Based on PI3K/Akt/mTOR Pathway