| H5N1高致病性禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 金 秋,刘 哲,陆敏华,戴望舒,徐 言,张 晓,曾晓燕,冯振卿,焦永军. H5N1高致病性禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达[J]. 南京医科大学学报(自然科学版), 2011, 0(11): 1583-1586 |
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| 作者姓名： | 金 秋 刘 哲 陆敏华 戴望舒 徐 言 张 晓 曾晓燕 冯振卿 焦永军 |
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| 作者单位： | 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029;南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029;南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029;南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029;南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029;南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029;卫生部肠道病原微生物重点实验室,江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所, 江苏 南京 210009;南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029;卫生部肠道病原微生物重点实验室,江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所, 江苏 南京 210009 |
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| 基金项目： | 江苏省自然科学基金(BK2006242,BK2008446,BK2009431),江苏省卫生厅基金(H200857) |
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| 摘 要： | 目的:扩增高致病性禽流感H5N1亚型病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因,并进行真核表达?方法:抽提毒株A/Jiangsu/08-6基因组RNA,反转录为cDNA,用特异性引物扩增HA基因?HA经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆到pFastBac-GP67B载体上,筛选出阳性重组转座质粒pFastBac-GP67B-HA,并将其进一步转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选和PCR鉴定后,获得重组穿梭载体(rBacmid-HA),再通过Cellfectin Ⅱ试剂转染rBacmid-HA至对数生长期的sf9昆虫细胞,进行目的蛋白的真核表达?分别用SDS-PAGE?Western blot?血凝试验以及质谱分析对其进行鉴定?结果:HA基因在sf9细胞表达的蛋白分子量约70 000?血凝试验表明重组HA蛋白可使鸡红细胞发生凝集?质谱分析鉴定该重组蛋白为HA 蛋白?结论:重组HA 蛋白具有天然HA蛋白的活性,为亚单位疫苗的研制及中和抗体的筛选奠定了基础?
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| 关 键 词： | H5N1型禽流感病毒 血凝素 杆状病毒昆虫细胞表达系统 血凝试验 |
| 收稿时间： | 2011-07-15 |
The expression of H5N1 highly pathogenic avian influenza virus HA gene in insect cells |
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| JIN Qiu,LIU Zhe,LU Ming-hu,DAI Wang-shu,XU Yan,ZHANG Xiao,ZENG Xiao-yan,FENG Zhen-qing and JIAO Yong-jun. The expression of H5N1 highly pathogenic avian influenza virus HA gene in insect cells[J]. Acta Universitatis Medicinalis Nanjing, 2011, 0(11): 1583-1586 |
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| Authors: | JIN Qiu LIU Zhe LU Ming-hu DAI Wang-shu XU Yan ZHANG Xiao ZENG Xiao-yan FENG Zhen-qing JIAO Yong-jun |
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| Affiliation: | Key Laboratory of Antibody Technology,Ministry of Health,NJMU,Nanjing 210029;Key Laboratory of Antibody Technology,Ministry of Health,NJMU,Nanjing 210029;Key Laboratory of Antibody Technology,Ministry of Health,NJMU,Nanjing 210029;Key Laboratory of Antibody Technology,Ministry of Health,NJMU,Nanjing 210029;Key Laboratory of Antibody Technology,Ministry of Health,NJMU,Nanjing 210029;Key Laboratory of Antibody Technology,Ministry of Health,NJMU,Nanjing 210029;Key Laboratory of Enteric Pathogenic Microbiology,Ministry of Health,Institute of Pathogenic Microbiology,Jiangsu Provincial Center for Disease Prevention and Control,Nanjing 210009,China;Key Laboratory of Antibody Technology,Ministry of Health,NJMU,Nanjing 210029;Key Laboratory of Enteric Pathogenic Microbiology,Ministry of Health,Institute of Pathogenic Microbiology,Jiangsu Provincial Center for Disease Prevention and Control,Nanjing 210009,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | H5N1 avian influenza virus hemagglutinin(HA) Bac-to-Bac baculovirus expression system hemagglutination test |
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