制备脱细胞真皮基质的实验研究

目的 采用高渗盐一胰蛋白酶法制备脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix，ADM)并进行组织学观察和微生物学检测，探讨这种方法的可行性和机制。方法 SD大鼠4只，分别麻醉后以8％硫化钠溶液脱去躯干部皮毛，常规消毒铺巾，切取大鼠背部全层皮肤制成厚约0.4mm的中厚皮，1mol／LNaCl溶液37℃浸泡48h分离表真皮，以0．25％胰蛋白酶 0.1％乙二酸二乙胺(EDTA)溶液37℃分别热消化60、70、80、90min脱去细胞成分，并进行冷冻干燥处理。ADM作光镜、电镜观察和微生物学检测并比较分析每只大鼠不同时间消化处理的ADM的差别和不同大鼠经相同处理得到的ADM的差别。结果消化时间不同的ADM均具有柔软、一定的柔韧性和伸展性、弹性好、弯曲不断裂的特点，组织学观察见表皮细胞均完全去除，但是消化90min，ADM的基底膜(Basement membrane complex，BMC)和胶原纤维的结构与排列有不同程度的破坏；消化60、70min的ADM虽然基底膜和胶原纤维的结构与排列正常存在，但脱细胞不完全；消化80min制备的ADM组织学检查基底膜完整连续．胶原纤维、弹力纤维结构及排列完整规则，没有细胞成分存在。不同SD大鼠经同样的处理所得的ADM一般形状和组织学没有明显差别。微生物学检测没有细菌生长。结论采用高渗盐一胰蛋白酶法制备脱细胞真皮基质的方法能达到既完全脱去细胞成分又使基底膜完整连续，胶原纤维和弹力纤维结构及排列正常的双重目标，ADM柔韧性好、不断裂，无细菌生长。

The preparation of an acellular dermal matrix