| PAI－1糖基化位点突变体的构建及其在哺乳动物细胞中表达 |
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| 引用本文： | 郝勤,张欣平,顾银良,宋后燕,朱运松.PAI－1糖基化位点突变体的构建及其在哺乳动物细胞中表达[J].复旦学报(医学版),1996(3). |
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| 作者姓名： | 郝勤 张欣平 顾银良 宋后燕 朱运松 |
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| 作者单位： | 上海医科大学基础医学院分子遗传学研究室 |
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| 摘 要： | Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂（ＰＡＩ－１）是一种Ｍｒ为５０×１０３的单链糖蛋白，有３７９个氨基酸残基，３个Ｎ型糖基化位点。构建ＰＡＩ－１糖基化突变体，以便研究糖链的功能。用寡核苷酸定位突变技术将３个糖基化位点２０９，２６５，３２９位进行突变，把３个糖基化位点都发生了突变的ＰＡＩ－１ｃＤＮＡ组装到真核表达载体ｐＳＶ２中，得到真核表达质粒ｐＺＨ－ｐ１－Ｍ３Ｅ；在二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯｄｈｆｒ－）中进行短暂表达，用发色底物法和夹心ＥＬＩＳＡ方法检测培养液中ＰＡＩ－１的活性和含量。结果：糖基化位点突变的ＰＡＩ－１能在ＣＨＯ细胞中表达，但表达水平及活性较低。非糖基化ＰＡＩ－１的活性和抗原分别为４．３４ＩＵ／ｍｌ和３．１５μｇ／Ｌ结论：用寡核苷酸定位突变方法获得了ＰＡＩ－１糖基化突变体，并且在ＣＨＯ细胞中得到表达。
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| 关 键 词： | Ⅰ型纤溶酶原激活剂抑制物 糖蛋白 寡核苷酸定位突变 寡糖链 |
CONSTRUCTION OF MUTANT GLYCOSYLATION SITES OF PAI-1 AND EXPRESSION IN MAMMALIAN CELLS |
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| Hao Qin, Zhang Xinping, Gu Yinliang, Song Houyan, Zhu Yunsong.CONSTRUCTION OF MUTANT GLYCOSYLATION SITES OF PAI-1 AND EXPRESSION IN MAMMALIAN CELLS[J].Fudan University Journal of Medical Sciences,1996(3). |
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| Authors: | Hao Qin Zhang Xinping Gu Yinliang Song Houyan Zhu Yunsong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | plasminogen activator inhibitor-1 glycoprotein oligonucleotide site-directed mutagenesis oligosaccharide chains |
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