人脐带间充质干细胞体外长期培养及向肝样细胞的分化

目的：观察人脐带间充质干细胞体外长期培养的生物学特性，探讨其向肝样细胞分化的可能性。方法：脐带来源于天津市第三中心医院住院的健康足月产妇，采用酶消化法分离培养人脐带间充质干细胞，待细胞生长至80%~90%融合时传代。取传至第9代细胞接种于12孔板内，调整细胞浓度为5×1010 L-1，加入含肝细胞生长因子、成纤维生长因子4、抑瘤素的DMEM培养基，诱导28 d。MTT法测定细胞生长活性，流式细胞仪检测细胞周期，免疫细胞化学及流式细胞仪鉴定细胞表型；免疫细胞化学染色鉴定诱导后肝细胞特异表面标志物的表达，以及糖原染色结果。结果：从人脐带中分离得到的间充质干细胞贴壁生长，形态类似于成纤维细胞，80%以上处于G0/G1期，具有良好的生长活性，可在体外稳定传代20次以上；CD29，CD90，CD105，Vimentin呈阳性表达，基本不表达造血细胞标志CD34和内皮细胞标志CD31。随诱导时间的延长，圆形细胞逐渐增多，形态似肝细胞；诱导1周时细胞开始表达肝细胞表面标志物甲胎蛋白、细胞胶蛋白18、细胞胶蛋白19；诱导3周时开始表达成熟肝细胞标志白蛋白；诱导4周时白蛋白表达增强，且诱导细胞糖原染色呈阳性。结论：从人脐带中可成功分离出间充质干细胞，实现体外长期培养，并可诱导分化为肝样细胞。