| 恙虫病东方体Gilliam株56kDa外膜蛋白基因的克隆与表达 |
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| 引用本文： | 陈唯军,陈香蕊,张雪颖,牛东升,陈梅玲,崔红,魏文进,温博海.恙虫病东方体Gilliam株56kDa外膜蛋白基因的克隆与表达[J].中国人兽共患病杂志,2004,20(4):279-283. |
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| 作者姓名： | 陈唯军 陈香蕊 张雪颖 牛东升 陈梅玲 崔红 魏文进 温博海 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院五所，军事医学科学院五所，军事医学科学院五所，军事医学科学院五所，军事医学科学院五所，军事医学科学院五所，军事医学科学院五所，军事医学科学院五所 博士研究生，北京100071，博士研究生，北京100071，博士研究生，北京100071，博士研究生，北京100071，博士研究生，北京100071，博士研究生，北京100071，博士研究生，北京100071，博士研究生，北京100071 |
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| 摘 要： | 目的 表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi)Gilliam株 5 6kDa外膜蛋白 ,探索其作为诊断抗原的可能性。方法 采用PCR方法 ,从Ot Gilliam株菌种基因组DNA中扩增出 5 6kDa外膜蛋白基因片段 ,将目的基因片段定向插入原核表达载体pQE30 ,再用重组质粒转化大肠杆菌 ,最后用IPTG诱导转化菌 ,SDS -PAGE和Western -blotting检测重组质粒目的基因的表达。结果 (1)获得长约 15 0 0bp的Ot Gilliam株 5 6kDa外膜蛋白基因 ,SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量5 6× 10 4处有表达带 ;(2 )DNA测序证明重组质粒 pQE30 / 5 6中插入的基因片段的序列与已报告的Ot Gilliam株 5 6kDa外膜蛋白基因序列基本一致。 (3)诱导表达菌体经超声破碎后 ,显示目的蛋白主要以包涵体形式存在 ;(4 )免疫印迹显示该重组质粒转化的大肠杆菌有一相对分子量约为 5 6× 10 4的独特蛋白带 ,该蛋白约占细菌蛋白总量的 2 9 4 %。结论 Ot Gilliam株5 6kDa外膜蛋白基因在大肠杆菌中获得了高效表达 ,表达的重组蛋白具有免疫反应性 ,与Ot Gilliam株感染的小鼠血清在免疫印迹中呈阳性反应。
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| 关 键 词： | 恙虫病东方体Gilliam株 PCR 56kDa基因 克隆表达 Western-blotting |
| 文章编号： | 1002-2694(2004)04-0279-05 |
| 修稿时间： | 2002年10月21 |
Cloning and expression of the 56 kDa outer membrane protein gene of Orientia tsutsugamushi Gilliam strain |
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| CHEN Wei-jun,CHEN Xiang-rui,ZHANG Xue-ying,NIU Dong-sheng,CHEN Mei-lin,CHUI Hong,WEI Wen-jin,WHEN Bo-hai.Cloning and expression of the 56 kDa outer membrane protein gene of Orientia tsutsugamushi Gilliam strain[J].Chinese Journal of Zoonoses,2004,20(4):279-283. |
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| Authors: | CHEN Wei-jun CHEN Xiang-rui ZHANG Xue-ying NIU Dong-sheng CHEN Mei-lin CHUI Hong WEI Wen-jin WHEN Bo-hai |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Orientia tsutsugamushi Gilliam PCR 56kDa protein gene clone and expression Western-blotting |
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