腺病毒载本的细菌内同源重组系统的建立和初步应用

肿瘤的基因治疗是近年的研究热点。理想的基因治疗应具有目的基因高效性、靶向性转 移和可控性表达的特点。目前的关键问题是新型载体的构建。复制缺陷性腺病毒具有感染细 胞范围广、滴度高,而且可在细胞周期的任何时段感染的优点,因此被越来越多地应用于基 因治疗的研究中。哺乳动物包装细胞293或911内的同源重组是产生重组腺病毒的传统方法, 但繁琐、低效,限制了腺病毒载体的更广泛应用。现在已经有一种新的载体系统［1］ ,利用了细菌中高效的同源重组机制代替哺乳动物细胞,同时利用在同源重组时整合入腺 病毒骨架中的绿色荧光蛋白（GFP）可以直接观察转染与感染的效率,大大方便了腺病毒的 重组与纯化。我们应用该细菌同源重组系统构建了携带GFP的重组腺病毒载体,并在感染后 的Hepa1-6细胞中观察到了GFP的表达,为该系统在基因治疗中的进一步应用提供了实验依 据。