两种脾虚证大鼠肝脏线粒体自噬及细胞凋亡的比较研究

目的比较脾气虚证和脾不统血证两种脾虚证模型大鼠肝脏线粒体自噬及细胞凋亡水平，探讨脾虚证发生发展过程中，肝脏细胞状态变化及可能的机制。方法32只SD大鼠随机分为4组：正常对照组（8只）、低分子肝素钠对照组（8只）、脾气虚组（8只）、脾不统血组（8只）。采用劳倦过度加饮食失节的方法复制脾气虚证大鼠模型，在脾气虚证的基础上采用低分子肝素钠诱导出血的方法构建脾不统血证大鼠模型；使用化学发光法检测大鼠肝组织三磷酸腺苷（ATP）含量；JC-1荧光探针法检测大鼠肝组织线粒体膜电位；Western Blot法检测各组大鼠肝组织线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin、LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平和细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、线粒体外Cyt-C的表达水平；使用荧光定量法检测PINK1、Parkin、Bcl-2 、Bax mRNA水平。结果与正常对照组及低分子肝素钠组比较， 两种脾虚证大鼠肝组织线粒体膜电位，ATP含量，PINK1、Bcl-2蛋白及mRNA水平显著降低（P<0.05， P<0.01）， 线粒体外Cyt-C蛋白水平、Bax mRNA水平显著升高（P<0.01）。与正常对照组比较，两种脾虚证大鼠LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值、Parkin蛋白水平显著降低（P<0.01）。与脾气虚证大鼠比较，脾不统血证大鼠肝组织线粒体膜电位、ATP含量降低（P<0.05， P<0.01），线粒体外Cyt-C蛋白水平、Bcl-2蛋白及mRNA 水平下降 （P<0.05， P<0.01），Cleaved caspase-3 蛋白水平、Bax 蛋白及mRNA 水平上升（P<0.05）。结论脾虚证大鼠肝组织细胞凋亡可能机制为，线粒体过度损伤导致线粒体自噬紊乱，进一步导致了细胞凋亡，随着脾虚证的加重，肝组织细胞凋亡程度加深。