红细胞裂解液对CD34+细胞相对计数的影响及其原因初步探讨

目的：研究红细胞（red blood cell，RBC）裂解液对CD34+细胞相对计数的影响。方法：收集101份外周血干细胞采集物，CD34-PE及CD45-FITC双色免疫荧光染色后，分别用FACS裂解液（FACSTM lysing solution，FACS）、Optilyse C裂解液（optilyse C lysing solution，Optilyse C）及自配裂解液溶解红细胞，采用洗涤程序和运用ISHAGE设门策略，检测CD34+细胞、淋巴、粒、单核细胞相对数，CD45+ 细胞占全部收集信号百分比及各类细胞前向散射光（forward scatter，FSC）及侧向散射光（side scatter，SSC）信号。结果：比较3种裂解液处理后样本的CD34+ 细胞百分比，FACS裂解液处理的样本CD34+ 细胞百分比最低，自配裂解液最高（FACS vs. Optilyse C vs. 自配=0.49±0.43 vs. 0.67±0.50 vs. 0.73±0.66，P=0.000）。FACS裂解后样本CD45+细胞百分比远高于Optilyse C及自配裂解液（t=142.500，P=0.000）。3种裂解液对淋巴细胞百分比结果（F=35.340，P=0.000）具有统计学差异；而粒细胞百分比（F=0.610，P=0.540）、单核细胞百分比（F=1.590，P=0.210）差异无统计学意义。FACS裂解液处理后，CD34+ 细胞、淋巴细胞的FSC和SSC信号强度均弱于Optilyse C裂解液及自配的裂解液；而粒、单核细胞的SSC信号，FACS裂解液处理后最强，Optilyse C裂解液处理后最弱。另外，动员后的白细胞数多少与CD34+ 细胞百分比不存在相关性（r=0.108，P=0.312）。结论：红细胞裂解液导致CD34+细胞相对计数差异的原因可能与CD45+细胞比例有关，即获取的有效细胞数；裂解液对细胞形态的影响与造成淋巴细胞比例有显著性差异有关。鉴于不同红细胞裂解液对CD34等抗原阳性细胞的相对计数确实有不良影响，因此在应用流式细胞术检测或计数时应慎重选择。

Influence of red blood cell lysing solution on comparative counting of CD34+ cells and its causes