骨髓间充质干细胞来源的外泌体促进牙周再生的体外研究

目的    研究人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stem cells， hBMMSCs）分泌的外泌体（exosome）对人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells， hPDLSCs）增殖和分化功能的影响，为进一步明确hBMMSCs促进牙周组织再生的机制提供实验基础和证据。方法    分别用酶消化法和离心法培养hPDLSCs和hBMMSCs，并用流式细胞术检测其间充质表面标志物。收集培养的第3代hBMMSCs上清液，利用试剂盒提取exosome，电镜下观察其结构，Western Bolt法检测其CD63表达水平。用hBMMSCs分泌的exosome处理hPDLSCs设为实验组，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测hPDLSCs的增殖情况，克隆形成率检测多克隆形成能力，成骨诱导后碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红染色并定量，同时实时荧光定量PCR（qPCR）检测成骨相关基因表达。结果    流式细胞术检测，hPDLSCs阳性表达CD29、CD44、CD90、CD146和Stro-1，hBMMSCs阳性表达CD29、CD44、CD90和 CD106，两者均阴性表达CD14、CD34和CD45。hBMMSCs分泌的exosome电镜下呈小球状，Western Bolt法检测其强表达CD63。实验组hPDLSCs经MTT法检测其增殖速率和克隆形成能力显著高于对照组（P < 0.05）。实验组hPDLSCs成骨诱导后ALP染色、茜素红染色定量表达显著强于对照组（P < 0.05）。qPCR检测成骨基因Runx2、OCN、ALP、BSP和Col-Ⅰ的表达，实验组显著高于对照组（P < 0.05）。结论    hBMMSCs分泌的exosome可促进牙周膜干细胞的体外增殖和成骨分化能力。