| 结核分枝杆菌furA基因片段的克隆、表达和分离纯化 |
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| 引用本文： | 高雪,薛莹,姜泓,柏银兰,师长宏,张海,李元,徐志凯.结核分枝杆菌furA基因片段的克隆、表达和分离纯化[J].第四军医大学学报,2004,25(18):1637-1640. |
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| 作者姓名： | 高雪 薛莹 姜泓 柏银兰 师长宏 张海 李元 徐志凯 |
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| 作者单位： | 第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033 |
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| 摘 要： | 目的: 获得结核分枝杆菌furA基因片段并高效表达、纯化. 方法: 用PCR技术从MTB毒株H37Rv-DNA中扩增出相应大小的DNA片段,将片段与pGEM-T-easy 载体连接后测序. 将测序正确的furA按照BamHⅠ和HindⅢ酶切位点克隆入原核表达载体pRSET-A,将连接产物转化入E.coli BL21,挑出阳性克隆,IPTG诱导表达重组的(His)6融合蛋白. 对重组融合蛋白通过镍柱进行纯化. 结果: PCR获得的furA序列与Genbank报道的一致(为453 bp). 重组载体在E.coli BL21中以可溶形式高效表达,融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,在Mr为23.0×103处有特异的蛋白条带,目的蛋白表达量占菌体总蛋白量的10%,重组蛋白经镍柱进行纯化后,得到了高纯度的FurA融合蛋白. 结论: 成功克隆结核分枝杆菌furA基因片段,并在E.coli BL21中高效表达,亲和层析纯化后获得高纯度FurA融合蛋白.
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| 关 键 词： | 分枝杆菌 结核 克隆 表达 纯化 |
| 文章编号： | 1000-2790(2004)18-1637-04 |
| 修稿时间： | 2004年5月14日 |
Cloning of Mycobacteria tuberculosis furA and expression of its coding protein fused with (His)6 tag |
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| GAO Xue,XUE Ying,JIANG Hong,BAI Yin-Lan,SHI Chang-Hong,ZHANG Hai,LI Yuan,XU Zhi-Kai.Cloning of Mycobacteria tuberculosis furA and expression of its coding protein fused with (His)6 tag[J].Journal of the Fourth Military Medical University,2004,25(18):1637-1640. |
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| Authors: | GAO Xue XUE Ying JIANG Hong BAI Yin-Lan SHI Chang-Hong ZHANG Hai LI Yuan XU Zhi-Kai |
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| Institution: | GAO Xue,XUE Ying,JIANG Hong,BAI Yin-Lan,SHI Chang-Hong,ZHANG Hai,LI Yuan,XU Zhi-Kai Department of Microbiology,School of Basic Medicine,Fourth Military Medical University,Xi'an 710033,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | FurA |
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